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土壤α-葡萄糖苷酶 (S-α-GC) 活性检测试剂盒说明书

发布时间:2025/3/27 15:12:28      阅读次数:21

α-葡萄糖苷酶 (S-α-GC) 活性检测试剂盒说明书

量法

注意:正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

号:JW-W-B931

规格:100T/48S

品简介:

S-GC 能够催化水解芳基或烃基与糖基原子团之间的糖苷键生成葡萄糖,是纤维素分解酶系中 组成成分之一,在土壤微生物的糖类代谢方面具有重要生理功能。

S-α-GC 催化对-硝基苯-α-D 吡喃葡萄糖苷生成对-硝基苯酚,产物略显黄色,在400nm 有特 光吸收。

验中所需的仪器和试剂:

见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、冰、  (不允许快递) 和蒸馏水。

品内容:

试剂一:甲苯 5mL×1 瓶,4℃保存;  (自备)

试剂:粉剂×1 瓶,-20℃保存;临用前每瓶加入 13mL 蒸馏水,充分溶解备用,用不完的试剂 -20℃保存

试剂三:液体 30mL×1 瓶,4℃保存

试剂:液体 20mL×1 瓶,4℃保存;

标准:液体×1 支,5mmol/L 的对硝基苯酚溶液。

标准样品的准备:

100μL 标准液,加入到 400μL 试剂三中,得到 1mmol/L 标准液,十倍稀释 100 μmol/L   蒸馏水倍比稀释:50 25 12.5 6.25μmol/L 100 50 25 12.5 6.25μmol/L 做标准液。

作步骤:

1 、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 400nm ,蒸馏水调零。

2 、加样表

剂名称

定管

对照管

准管

白管

干土样 (g)

0.02

0.02

-

-

剂一 (μL)

10

10

-

-

振荡匀,使土样全部湿润,室温放置 15min

剂二 (μL)

130

-

-

-

剂三 (μL)

160

160

-

-

混匀,37水浴 1h 后,立即沸水浴煮沸 5min  (盖紧,防止水分散失) ,流水冷却

剂二 (μL)

-

130

-

-

充分混匀,10000g 常温离心 10min ,取上清

清液 (μL)

70

70

-

 

准液 (μL)

-

-

70

 

 


 

 

 

馏水 (μL)

-

-

-

70

试剂四 (μL)

130

130

130

130

充分混匀,室温静置 2min 后,测定吸光值 A ,计算ΔA=A 测定管-A 对照管。每个测定管设 个对照管。

曲线建立:根据标准管的浓度 (y) 和吸光度ΔA=A 标准管-A 空白管 (x ) ,建立标准曲线。

S-α-GC 活力的计算:

标准曲线,将ΔA  (x ) 带入公式计算样品浓度 (μmol/L) 。

单位的定义:每 g 土样中产生 mol -硝基苯酚定义为一个酶活力单位。 S-α-GC 活力 (U/g  土样) =y×V 反总÷W÷T=0.36×y

T :反应间,1h=1/24dV 反总:反应体系总体积:3×10-4L W:样本质量,0.02g

 


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