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发布时间：2025/3/27 15:12:28 阅读次数：202
土壤α-葡萄糖苷酶 (S-α-GC) 活性检测试剂盒说明书
微量法
注意：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。
货号：JW-W-B931
规格：100T/48S
产品简介：
S-α-GC 能够催化水解芳基或烃基与糖基原子团之间的糖苷键生成葡萄糖，是纤维素分解酶系中 重要组成成分之一，在土壤微生物的糖类代谢方面具有重要生理功能。
S-α-GC 能够催化对-硝基苯-α-D 吡喃葡萄糖苷生成对-硝基苯酚，产物略显黄色，在400nm 有特 征光吸收。
试验中所需的仪器和试剂：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、冰、 甲苯 (不允许快递) 和蒸馏水。
产品内容：
试剂一：甲苯 5mL×1 瓶，4℃保存； (自备)
试剂二：粉剂×1 瓶，-20℃保存；临用前每瓶加入 13mL 蒸馏水，充分溶解备用，用不完的试剂 仍-20℃保存；
试剂三：液体 30mL×1 瓶，4℃保存；
试剂四：液体 20mL×1 瓶，4℃保存；
标准品：液体×1 支，5mmol/L 的对硝基苯酚溶液。
标准样品的准备：
取100μL 标准液，加入到 400μL 试剂三中，得到 1mmol/L 标准液，十倍稀释到 100 μmol/L ， 用 蒸馏水倍比稀释：50 、25 、12.5 、6.25μmol/L 。100 、50 、25 、12.5 、6.25μmol/L 做标准液。
操作步骤：
1 、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 400nm ，蒸馏水调零。
2 、加样表
| 试剂名称 | 测定管 | 对照管 | 标准管 | 空白管 |
| 风干土样 (g) | 0.02 | 0.02 | - | - |
| 试剂一 (μL) | 10 | 10 | - | - |
| 振荡混匀，使土样全部湿润，室温放置 15min | ||||
| 试剂二 (μL) | 130 | - | - | - |
| 试剂三 (μL) | 160 | 160 | - | - |
| 混匀，37℃水浴 1h 后，立即沸水浴煮沸 5min (盖紧，防止水分散失) ，流水冷却 | ||||
| 试剂二 (μL) | - | 130 | - | - |
| 充分混匀，10000g 常温离心 10min ，取上清液 | ||||
| 上清液 (μL) | 70 | 70 | - |
|
| 标准液 (μL) | - | - | 70 |
|
| 蒸馏水 (μL) | - | - | - | 70 |
| 试剂四 (μL) | 130 | 130 | 130 | 130 |
充分混匀，室温静置 2min 后，测定吸光值 A ，计算ΔA=A 测定管-A 对照管。每个测定管设一 个对照管。
标准曲线建立：根据标准管的浓度 (y) 和吸光度ΔA=A 标准管-A 空白管 (x ) ，建立标准曲线。
S-α-GC 活力的计算：
根据标准曲线，将ΔA (x ) 带入公式计算样品浓度 (μmol/L) 。
单位的定义：每天每 g 土样中产生 1μmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。 S-α-GC 活力 (U/g 土样) ＝y×V 反总÷W÷T=0.36×y
T ：反应时间，1h=1/24d；V 反总：反应体系总体积：3×10-4L ；W：样本质量，0.02g。
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