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发布时间：2025/3/28 11:45:31 阅读次数：25
谷氨酰胺合成酶（GS）活性检测试剂盒说明书
微量法
注意：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。
货号：YX-W-A807 规格：100T/48S
产品内容：
提取液：液体 60mL×1 瓶，4℃保存。 试剂一：液体 10mL×1 瓶，-20℃保存。 试剂二：液体 10mL×1 瓶，-20℃保存。
试剂三：粉剂×2 瓶，-20℃保存。用时每瓶加入 5mL 双蒸水充分溶解备用，用不完的试剂仍-20℃ 分装保存。
试剂四：液体 15mL×1 瓶，4℃保存。
产品说明：
GS（EC 6.3.1.2）主要存在于植物中，是生物体内氨同化的关键酶之一，催化铵离子和谷氨酸 合成谷氨酰胺，不仅可以防止过多的铵离子对生物有毒性，而且谷氨酰胺也是氨的主要储存和运 输形式。
GS 在 ATP 和 Mg2+存在下，催化铵离子和谷氨酸合成谷氨酰胺；谷氨酰胺进一步转化为γ─谷氨 酰基异羟肟酸，在酸性条件下与铁形成红色的络合物；该络合物在 540nm 处有最大吸收峰。
所需的仪器和用品
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、研 钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本测定的准备
1 、细菌、细胞或组织样品的制备：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104 个）：提 取液体积（mL）为500~ 1000：1 的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL 提取液），超声波破碎细 菌或细胞（冰浴，功率20％或200W ，超声3s ，间隔10s ，重复30 次）；8000g 4℃离心10min ，取上 清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0. 1g组织，加入1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min ，取上清，置冰上待测。
2 、血清（浆）样品：直接检测。
二、测定步骤
1 、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 540nm ，蒸馏水调零。
2 、在 EP 管中加入下列试剂：
| 试剂名称 (µL） | 测定管 | 对照管 |
| 试剂一 | 160 |
|
| 试剂二 |
| 160 |
| 试剂三 | 70 | 70 |
| 样本 | 70 | 70 |
| 混匀，37℃（哺乳动物）或 25℃（其他物种）准确水浴 30min | ||
| 试剂四 | 100 | 100 |
混匀，静置 10min 后，5000g ，常温离心 10min，取 200µL 上清液至微量玻璃比色皿或 96 孔 板中，测定 540nm 处的吸光值 A 。△A=A 测定管-A 对照管。每个测定管需设一个对照管。
三、GS 活力单位的计算
1. 用微量玻璃比色皿测定的计算公式如下
（1） 按血清（浆）体积计算
单位定义：每 mL 血清（浆）在每 mL 反应体系中每 min 使 540 下吸光值变化 0.01 定义为一 个酶活力单位。
GS（U/mL）=∆A×V 反总÷V 样÷0.01÷T = 19×∆A
（2） 按样本蛋白浓度计算
单位的定义：每 mg 组织蛋白在反应体系中每 min 使 540nm 下吸光值变化 0.01 定义为一个酶活 力单位。
GS（U/mg prot）= ∆A×V 反总÷（Cpr×V 样）÷0.01÷T = 19×∆A÷Cpr
（3） 按样本鲜重计算
单位的定义：每 g 组织在反应体系中每 min 使 540nm 下吸光值变化 0.01 定义为一个酶活力单 位。
GS（U/g 鲜重）= ∆A×V 反总÷（V 样÷V 样总×W）÷0.01÷T = 19×∆A÷W
（4） 按细菌或细胞数量计算
单位定义：每1万个细菌或细胞在每mL反应体系中每min使540nm下吸光值变化0.01定义为一个 酶活力单位。
GS（U/104 cell）= ∆A×V反总÷（500×V样÷V样总）÷0.01÷T =0.038×∆A
V 反总：反应体系总体积，400µL=0.4mL；V 样：加入样本体积，70µL=0.07mL；V 样总：加 入提取液体积，1 mL；T ：反应时间，30 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量，g； 500：细菌或细胞总数，500 万。
2. 用 96 孔板测定的计算公式如下
（1） 按血清（浆）体积计算
单位定义：每 mL 血清（浆）在每 mL 反应体系中每 min 使 540 下吸光值变化 0.005 定义为一 个酶活力单位。
GS（U/mL）=∆A×V 反总÷V 样÷0.005÷T =38×∆A
（2） 按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每 mg 组织蛋白在反应体系中每 min 使 540nm 下吸光值变化 0.005 定义为一个酶 活力单位。
GS（U/mg prot）= ∆A×V 反总÷（Cpr×V 样）÷0.005÷T =38×∆A÷Cpr
（3） 按样本鲜重计算：
单位的定义：每 g 组织在反应体系中每 min 使 540nm 下吸光值变化 0.005 定义为一个酶活力单 位。
GS（U/g 鲜重）= ∆A×V 反总÷（V 样÷V 样总×W）÷0.005÷T =38×∆A÷W
（4） 按细菌或细胞数量计算
单位定义：每1万个细菌或细胞在每mL反应体系中每min使540nm下吸光值变化0.005定义为一个 酶活力单位。
GS（U/104 cell）= ∆A×V反总÷（500×V样÷V样总）÷0.005÷T =0.076×∆A
V 反总：反应体系总体积，400µL=0.4mL；V 样：加入样本体积，70µL=0.07mL；V 样总：加 入提取液体积，1 mL；T ：反应时间，30 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量，g； 500：细菌或细胞总数，500 万。
注意事项：
试剂一、试剂二可能会有析出，可以重悬后使用，反应后取上清测定。
本产品仅供科学研究使用！请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途！
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