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还原糖含量检测试剂盒说明书

发布时间:2025/3/28 11:49:49      阅读次数:32

还原糖含量检测试剂盒说明书

微量法

货号:    JW-W-B609 规格:     100T/48S

产品内容:

试剂一: 液体 100mL×1 瓶,4℃保存;

试剂二: 液体 20mL×1 瓶,4℃保存;

标准品: 粉剂×1 支,4℃保存,含 10mg 无水葡萄糖(干燥失重<0.2%),临用前加入 1mL 蒸 馏水溶解备用,4℃可保存 1 周,或者用饱和苯甲酸溶液溶解,可保存更长时间。

标准品准各:     将标准品用蒸馏水稀释至 0.3 、0.25 、0.2 、0. 15 、0. 1 、0.05mg/mL。

产品说明:

还原糖广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。植物体内的还原糖主要包括葡萄糖、果 糖和麦芽糖等,是最常见的单糖和双糖,其中葡萄糖和果糖不仅是呼吸作用的主要底物,也是进一 步合成蔗糖、淀粉和纤维素的底物。

加热促进碱性溶液中 3,5-二硝基水杨酸溶液与还原糖生成棕红色氨基化合物,在 540nm 有特征 吸收峰; 在一定的浓度范围内,还原糖含量与 540nm 吸光度成线性关系,根据标准曲线,即可求出 样品中还原糖的量。

试验中所需的仪器和试剂:

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96  孔板、研钵、蒸馏水。

操作步骤:

一、样品中还原糖的提取:

1 、 细菌或细胞的处理: 收集细菌或细胞到离心管内, 离心后弃上清; 按照细菌或细胞数量(104    个): 试 剂一体积(mL)为 500~ 1000:1   的比例(建议 500  万细菌或细胞加入 1mL  试剂一),超声波 破碎细菌或细胞(冰浴, 功率 20%或 200W ,超声 3s ,间隔 10s ,重复 30 次),转移到有盖离心 管中(防止加热时水分散失),80℃水浴中 40min  并且振荡 8~ 10  次, 8000g,25℃离心 10min ,取 上清供测定用。

2 、 组织的处理: 按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1:5~ 10   的比例(建议称取约 0. 1g 组织, 加入 1mL  试剂一),冰浴匀浆, 转移到有盖离心管中(防止加热时水分散失),80℃水浴中 40min 并且振荡 8~ 10  次,8000g ,25℃离心 10min ,取上清供测定用。

3 、 血清(浆) 的处理: 按照血清(浆) 体积(mL):试剂一体积(mL)为 1:5~ 10  的比例(建议取 0. 1mL  血清(浆)加入 0.9mL  试剂一),冰浴匀浆, 转移到有盖离心管中(防止加热时水分散失), 80℃水浴中 40min  并且振荡 8~ 10  次,8000g ,25℃离心 10min ,取上清供测定用。

二、测定操作表:

1.     分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 540nm ,蒸馏水调零。

2.     在 EP 管中加入下列试剂:

试剂

( μL)

对照管

测定管

标准管

空白管

样本

175

175

-

-

标准液

-

-

175

 

试剂二

-

125

125

125

蒸馏水

125

-

-

175

混均匀,在沸水浴中加热 5min(盖紧,防止水分散失),取出后立即冷却至室温, 混匀。取 200μL 至微量玻璃比色皿或 96  孔板中,540nm  波长下读取标准管、对照管、测定管和空白管吸光值。计 算ΔA=A 测定-A 对照。

根据标准管的浓度和吸光度(A 标准管-A 空白管) 建立标准曲线,x 为吸光值,y 为标准品浓度(mg/mL)。

注意:

1.   每个测定管需设定一个对照管。

2.   如果ΔA 大于 2 ,需要将样本用试剂一稀释,计算公式中乘以相应的稀释倍数。

还原糖含量计算:

1 、根据标准曲线计算样品中还原糖的含量,即将ΔA(A 测定管-A 对照管) 带入 x 计算出 y 值。

2 、按样本鲜重计算:

还原糖(μg/g 鲜重)= 1000×y ×V1÷W= 1000×y÷W 3 、按样本蛋白浓度计算:

还原糖(μg/mg prot)=( 1000×y ×V1)÷(V1×Cpr)= 1000×y÷Cpr 4 、按细菌或细胞数量计算:

还原糖(μg /104 cell)=1000×y ×V1÷500=2×y

5 、按血清(浆) 体积计算:

还原糖(μg/mL)=1000×y ×V2÷V3= 10000×y

1000:单位换算系数,1mg/mL= 1000μg/mL;V1:加入试剂一体积,1mL;V2:加入血清和试 剂一总体积,1 mL;V3:加入血清(浆) 体积,0. 1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本 质量,g;500:细菌或细胞总数,500 万。

注意:    最低检测限为  0.5mg/g 鲜重或 10μg/mg prot

 

本产品仅供科学研究使用! 请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途!


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