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发布时间：2025/3/28 14:32:07 阅读次数：33
货号：JW-W-B922 规格：100 管/48 样
土壤亚硝酸还原酶（Solid-Nitrite reductase ，S-NiR） 试剂盒说明书
微量法
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
土壤亚硝酸还原酶是反硝化作用中的关键酶之一，参与亚硝酸盐至 NO 的还原反应，它的 活性反映了生物降解过程中氮素的转化效率，为氮素转化规律的研究提供一定的依据。
测定原理
亚硝酸还原酶可将NO2-还原为NO，使样品中参与重氮化反应生成紫红色化合物的NO2-减少， 即540nm处吸光值的变化可反应土壤中亚硝酸还原酶的活性。
需自备的仪器和用品
天平、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、水浴锅、低温离心机。 试剂的组成和配制
试剂一：液体 4mL×1 瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前加4mL蒸馏水溶解。 试剂三：液体 4mL×1 瓶，4℃保存。
试剂四：液体 6mL×1 瓶，4℃避光保存。 试剂五：液体 6mL×1 瓶，4℃保存。
工作液：临用前根据用量将试剂四和试剂五以 1:1 的比例混合。 测定操作表
|
| 空白管 | 对照管 | 测定管 |
| 风干土样（ g） |
| 0.02 | 0.02 |
| 蒸馏水 (μL） |
| 40 |
|
| 试剂一 (μL） | 40 |
| 40 |
| 试剂二 (μL） | 40 | 40 | 40 |
| 混匀后，25℃反应 1h | |||
| 试剂三 (μL） | 40 | 40 | 40 |
| 充分震荡 30S，10000rpm，4℃ , 离心 10min | |||
| 上清液 (μL） | 100 | 100 | 100 |
| 工作液 (μL） | 50 | 50 | 50 |
| 充分混匀，室温静置显色 20min，于微量石英比色皿/96 孔板中测定540nm 各管吸光值，分别 记为 A 空白管、A 对照管、A 测定管。 | |||
计算公式
a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线：y=0.0129x-0.0106，R2 =0.9985
酶活单位定义：每g土样每24h还原1μmol NO2ˉ的量为一个酶活力单位。
S-NiR (μmol/d /g）=[A 空白管-(A 测定管-A 对照管)+0.0106]÷0.0129×V 反总÷W÷T = 186.05×[A 空白管-(A 测定管-A 对照管)+0.0106]÷W
V 反总：反应体系总体积，0.1mL；T：反应时间，1h=1/24d； W：样本质量，g。
b. 使用 96 孔板测定的计算公式如下
标准曲线：y=0.0065x-0.0106，R2 =0.9985
酶活单位定义：每g土样每24h还原1μmol NO2ˉ的量为一个酶活力单位。
S-NiR (μmol/d /g）=[A 空白管-(A 测定管-A 对照管)+0.0106]÷0.0065×V 反总÷W÷T
= 369.23×[A 空白管-(A 测定管-A 对照管)+0.0106]÷W V 反总：反应体系总体积，0.1mL；T：反应时间，1h=1/24d； W：样本质量，g。 注意事项
配制好的试剂二和工作液3天内使用完。
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