关于商城

商城指南

支付方式

配送方式

售后服务

原位细胞凋亡检测试剂盒

发布时间：2025/4/1 9:48:27 阅读次数：17

CAT#：JW-11-230510 低温运输及保存

原位细胞凋亡检测试剂盒， POD In Situ Cell Apoptosis Detection Kit, POD
使用手册 V1.0

产品及特点细胞凋亡在许多生理过程中是至关重要的。目前已经描述了几种鉴定细胞凋亡的
方法。核内解离被认为是凋亡的关键生化事件，导致双链，低分子量 DNA 片段以及高分子量 DNA 中的单链断裂。可以通过在酶反应中用修饰的核苷酸标记游离的 3'-OH 末端来鉴定那些 DNA 链断裂。末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）可以催化 DIG-dUTP 释放 3'-OH DNA 末端。 DIG-dUTP 首先与生物素偶联的抗地高辛抗体反应，后者与链霉抗生物素蛋白（ SABC）结合。结合 DAB ，在显微镜下分析凋亡细胞染色黄色。

规格及成分
本产品使用大纸盒包装
成分                                   编号                  规格            包装
标记缓冲液                              11-230510a             5mL         10mL 棕色瓶
末端转移酶，20×                    11-230510b            100μL       0.5mL 红盖管
地高辛-11-dUTP 溶液，20×    11-230510c           100μL        0.5mL 蓝盖管
封闭剂                                      11-230510d          20mL         30mL 棕色瓶
生物素偶联抗地高辛抗体          11-230510e            100μL       0.5mL 绿盖管
SABC ， 100 ×                        11-230510f              100μL        0.5mL 红盖管
蛋白酶 K ，200 ×                     11-230510g          250μL         0.5mL 白盖管
抗体稀释液                             11-230510h           20mL          30mL 本色瓶
阳性对照样品                            11-230510i             2 样          塑料袋
使用手册                                   11-230510sc          1 份           无

运输及保存：低温运输及保存，有效期一年。
自备试剂：中性树胶、 NaCl、Tris 、乙酸、 3 ％H 2 O 2、双蒸水、二甲苯等

使用方法
1.样品制备:
a.   对于细胞涂片：在室温下用 4％多聚甲醛固定 30-60 分钟，并用 PBS 冲洗两次，每次 2-5 分钟。
b.   对于冷冻切片：在室温下用 4％多聚甲醛固定 30-60 分钟，并用 PBS 冲洗两次，每次 2-5 分钟。
c.   对于石蜡切片：根据标准方案进行脱水和脱水组织切片，并用 PBS 冲洗两次，每次 2 分钟。
2. 加入 50μL 新鲜制备的 3 ％H 2 O 2 ，并在室温下孵育 10 分钟。
3. 用双蒸水洗涤三次，每次 2 分钟。
4.用 0.01M TBS 将蛋白酶 K ，200 ×   to    1 × 工作液。
5.   (0.01M TBS 的制备：加入 8.5g NaCl, 1.2g Tris and 0.45-0.5 mL 乙酸至 1L 双蒸水中，溶解，混匀。)
6.   加入 20-100 μL 蛋白酶 K 工作液至样品中 (仅限石蜡切片，细胞和冷冻切片不需要蛋白 K 消化），并在 37℃下消化 5-15 分钟。然后用 0.01M TBS 冲洗 3 次，每次 2 分钟。反应混合物的制备：加入 1 μL 末端转移酶， 20 × and 1 μL 地高辛-11-dUTP 溶液，20×至 18 μL 标记缓冲液中，混匀。
7.   将反应混合物加入到样品中，在二氧化碳培养箱中， 37℃ , 孵育 2 小时。
8.   用 0.01M 的 TBS 洗涤三次，每次 2 分钟。 Rinse with 0.01M TBS three times, 2 minutes each time.
9.   加入 50 封闭剂，室温孵育 30 分钟，丢弃阻断试剂，在此步骤无需洗涤样品。
10. 用抗体稀释液按照 1:100 的比例稀释生物素偶联抗地高辛抗体, 混匀，加入 50μL 至样品中。
11. 在二氧化碳培养箱中， 37℃ , 孵育 2 小时
12. 用 0.01M TBS 洗涤 3 次,每次两分钟。
13. 用抗体稀释液按照 1:100 的比例稀释 SABC ，混匀，加入 50 μL 至样品中。
14. 在二氧化碳培养箱中， 37℃ , 孵育 2 小时
15. 用 0.01M TBS 洗涤 3 次,每次五分钟。
16. Dilute 900 μL DAB Buffer (50 μL DAB Substrate (20 X) and 50 μL DAB Chromogen (20 X) to 850μL ddH2O and mix well.
17. 在每个载玻片上加入 50μLDAB 混合物，避光，并在室温下孵育 5-10 分钟。
18. 用双蒸水洗涤载玻片。
19. 用苏木素染液染色 5-10 分钟.
20. 用双蒸水冲洗两次，每次 5 分钟。
21. 75%乙醇中室温浸泡 5 分钟；
22. 85%乙醇中室温浸泡 5 分钟；
23. 95%乙醇中室温浸泡 5 分钟；
24. 二甲苯室温浸泡 15 分钟，
25. 中性树胶封片：加中性树胶盖玻片封片

关联产品    白细胞 DNA 提取试剂盒（过柱法）
20230506lyl