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牙髓卟啉单胞菌染料法 PCR 试剂盒

发布时间：2025/4/1 10:36:30 阅读次数：244

CAT#:JW-14-42910 低温运输，-20℃保存

牙髓卟啉单胞菌染料法 PCR 试剂盒

Porphyromonas endodontalis SYBR qPCR Kit

产品及特点 牙髓卟啉单胞菌（ Porphyromonas endodontalis）是一种革兰氏阴性细菌，

于 1976 年首先从感染牙齿根管中的产黑色素类杆菌群中分离出来，现已被认为是感染牙齿根管生态环境中的核心细菌之一。而根尖牙乳头干细胞是年轻恒牙牙根生理性发育与成熟的重要细胞学基础，故牙齿根管细菌感染对其细胞活性的影响关系着年轻恒牙牙根继续发育的潜能，因此快速检测牙髓卟啉单胞菌具有重要的意义。本产品是以染料法荧光定量 PCR 技术为基础开发的专门检测牙髓卟啉单胞菌的试剂盒，它具有下列特点：

1. 即开即用，用户只需要提供样品 DNA 模板。

2. 引物经过优化，灵敏性高，分析灵敏度可以达到 100 拷贝/反应。

3. 提供阳性对照，便于制备标准曲线和排除无效实验。

4. 特异性高，引物是根据牙髓卟啉单胞菌高度保守区设计，不会跟其他生物的

DNA 发生交叉反应。

5. 本产品足够 50 次 20μL 体系的染料法荧光定量 PCR 反应。

6. 既可用于定性，也可用于定量。用于定量时线性范围至少 5 个数量级。

7. 本产品只能用于科研。

规格及成分 本产品采用 5 孔盒包装

成分	编号	规格	包装
2×SYBR qPCR MasterMix	990408	0.5 mL	0.5mL 本色盖
荧光 PCR 专用模板稀释液	180701	1 mL	1.5mL 绿盖管
超纯水	210806	1 mL	1.5mL 蓝盖管
牙髓卟啉单胞菌染料法 qPCR 引物混合液	yw14-42910my	100 μL	0.5mL 白盖管
牙髓卟啉单胞菌 qPCR 阳性对照(1E7 拷贝/μL)	pc14-42910	50 μL	0.5mL 黄盖管
使用手册	14-42910sc	1 份	无

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为 12 个月。

自备试剂 样品 DNA。

使用方法 一、稀释标准曲线样品（以 1E1-1E6 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）。由于

标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的 DNA 片段作为阳性对照。

1. 标记 6 个离心管，分别为 6 ， 5 ， 4 ， 3 ，2 ， 1。

2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 专用模板稀释液，最好用带芯枪头，下

同）。 3. 在 6 号管中加入 5 μL 1E7 拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡 1 分钟，得 1E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。 4. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。 5. 换枪头，在 4 号管中加入 5 μL 1E5 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1E4 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。 6. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。二、样品 DNA 的制备 7. 如果有 N 个样品，最好设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳性对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 第 6 步所得的第 4 号稀释液（ 1E4 拷贝/μL）再加上一定量的水使总体积跟核酸纯化试剂盒所要求的起始样本体积一样，以此作为 PC 。另外用水作为 NC。 8. 用自选方法纯化样品的 DNA ，本试剂盒跟市场上大多数样品 DNA 提取试剂盒兼容，也可使用本公司的免提取核酸释放剂。三、染料法 qPCR 反应（ 20μL 体系，在样品制备室进行） 9. 如果做定量分析并且只做 1 次重复，则标记 N+9 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品， 1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），6 个用于标准曲线。如果做定性分析，并且只做 1 次重复，则标记 N+4 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品， 1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板）， 1 个用于 PCR 阳性对照（用第 6 步第 4 号管的阳性对照稀释液做模板）。下面只以定量分析为例描述操作步骤。 10. 在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加）：
	成分	样品管 N+2 个	PCR 阴性对照管	标准曲线样品管（ 1-6 管）
	2×SYBR qPCR MasterMix	10 μL	10 μL	各 10 μL
	牙髓卟啉单胞菌染料法 qPCR 引物混合液	2 μL	2 μL	各 2 μL
	N+2 个待测 DNA 模板	8 μL	不加	不加
	超纯水	不加	8 μL	不加
	第 6 步所得标准曲线样品	不加	不加	各 8μL（2 号样到 2

稀释液（ 1-6 号）

号管，3 号样到 3 号管…）

11. 盖上盖子后上机，按下面参数进行 PCR：

过程	温度	时间
预变性	95℃	5 分
PCR 反应（35 个循环）	95℃	10 秒
PCR 反应（35 个循环）	60℃	40 秒（采集 SYBR 通道的荧光信号）
溶解曲线分析		按 qPCR 仪器手册执行