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RNA荧光（RiboGreen）定量检测试剂盒产品说明书

发布时间：2025/4/30 9:15:55 阅读次数：2

RNA 荧光（RiboGreen）定量检测试剂盒产品说明书

主要用途
RNA荧光（RiboGreen）定量检测试剂是一种旨在通过使用RiboGreen荧光染料与样品中RNA的高度结合而产生荧光信号来精确定量样品中RNA含量的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种分子生物学实验，例如体外转录RNA、Northern Bolt、S1核酸酶检测、RNA酶保护检测、cDNA 库制备、逆转录PCR和差异显示PCR中RNA含量分析。产品严格无菌，即到即用，性能稳定，高度敏感。

技术背景
作为RNA 染色剂之一的RiboGreen 荧光染料与样品中RNA，包括rRNA、mRNA 等结合，产生荧光信号。RiboGreen 技术可以检测到低达 1 纳克 RNA 的变化。RNA 的微量增加引起荧光信号强度（Intensity）或相对荧光单位（RFU）的显著增加。其自发荧光（Autofluorescence）忽略不计，重复性标准差异（Standard Deviation）低，不受样品化学成分的干扰。

产品内容
染色液（Reagent    A）    微升
稀释液（Reagent    B）    毫升
标准液（Reagent    C）    微升
产品说明书                        1 份

保存方式
保存染色液（Reagent A）和标准液（Reagent C）在－20℃冰箱里，避免反复冻融；其余的保存在 4℃冰箱里，染色液（Reagent A）避免光照，有效保证 6 月

用户自备
1.5 毫升离心管：用于样品操作的容器
200 微升 1 厘米光径比色皿或黑色 96 孔板：用于荧光分析的容器荧光分光光度仪或荧光酶标仪：用于荧光定量分析

实验步骤
一、测定准备
1．准备好待测样品，置于冰槽里
2．设定好荧光分光光度仪：激发波长 485±10nm，散发波长 530±12.5nm，并置零
3．实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的染色液（Reagent A）置于冰槽里融化。然后移出xx 微升稀释液（Reagent B）到新的 1.5 毫升离心管，加入 xx 微升染色液（Reagent A），混匀后，用锡纸包裹，标记为染色工作液（5 次测定量），放在暗室里。然后进行下列操作。

二、构建标准曲线
1 ．准备好 5 个 1.5 毫升离心管，标记为 1 至 5 号管
2 ．分别加入 xx 微升稀释液（Reagent B）到每个离心管
3 ．移取 xx 微升标准液（Reagent C）到 1 号管，混匀
4 ．小心移取 xx 微升 1 号管稀释的标准液（Reagent C）到 2 号管，混匀
5 ．小心移取 xx 微升 2 号管稀释的标准液（Reagent C）到 3 号管，混匀
6 ．小心移取 xx 微升 3 号管稀释的标准液（Reagent C）到 4 号管，混匀
7 ．将 1 至 5 号管放进冰槽里备用；标准管含量见下表

管号    稀释液（Reagent B）    标准液（Reagent C）    标准 DNA 总量
1            xx 微升                                xx 微升                       xx 纳克/毫升
2           xx 微升                               xx 微升 1 号管              xx 纳克/毫升
3           xx 微升                                xx 微升 2 号管             xx 纳克/毫升
4           xx 微升                               xx 微升 3 号管              xx 纳克/毫升
5            xx 微升                              空对照                               0

8 ．移取 xx 微升含有染色液（Reagent A）和稀释液（Reagent B）的染色工作液到新的比色皿
9 ．加入 100 微升上述配制的标准液
10 ．室温下，孵育 5 分钟，避免光照
11．即刻放进荧光分光光度仪测读：获得相对荧光单位（Relative Fluorescence Unit；RFU）
12 ．重复实验步骤 8 至 11 四次
13 ．绘制标准曲线：纵座标（Y 轴）为相对荧光单位（RLU）；横坐标（X 轴）为 DNA 含量（纳克/毫升）

三、样品检测
1 ．移取 xx 微升含有染色液（Reagent A）和稀释液（Reagent B）的染色工作液到新的比色皿
2 ．加入 100 微升待测样品
3 ．室温下，孵育 5 分钟，避免光照
4 ．即刻放进荧光分光光度仪测读：获得相对荧光单位（Relative Fluorescence Unit；RFU）
5 ．根据标准曲线获得样品对应 RNA 含量（纳克/毫升）

注意事项
1．本产品为 25 次操作，包括标准曲线测定
2．整个操作须带手套，建议使用滤芯枪头，并格外小心，防止降解 RNA
3．建议所有的操作用品属于 RNA 专用
4．使用新鲜配制的染色工作液，务必不要超过 2 小时，且注意避光
5．孵育时，避免光照
6．系统检测，标准曲线测定 1 次即可；如果仪器更换，则需要重新测定 1 次
7．如果荧光读数过高，可以相应稀释样品量
8．盐类、尿素、乙醇、氯仿、去垢剂、蛋白、琼脂糖不会干扰检测
9．如果样品中含有 DNA，建议使用 5 单位 DNA 酶，37℃孵育 90 分钟预处理
10．本公司提供系列 RNA 检测试剂产品

质量标准
1．本产品经鉴定性能稳定
2．本产品经鉴定高度敏感

使用承诺
上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺 ”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后 10 天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒
IF IT DOESN ’T WORK，RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息
单组分订购信息

编号                           名称                                                                   规格
G&VS20129            RNA 荧光（RiboGreen）定量检测试剂盒           20 次
G&VS20129A        染色液（Reagent A）                                         微升
G&VS20129B          稀释液（Reagent B）                                         毫升
G&VS20129C          标准液（Reagent C）                                         毫升

试剂盒订购信息
产品编号                产品名称                                                      规格
G&VS12046            DEPC 水                                                  500 毫升
G&VS12047            DMDC 水                                                     500 毫升
G&VS20016.1    DEPC 处理试剂盒                                             100 次
G&VS20016.2    DMDC 处理试剂盒                                            100 次
G&VS12039.1    RNA 样品储存液                                                50 毫升
G&VS12039.2    纯化 RNA 样品储存液                                        50 毫升
G&VS20101       mRNA 纯化树脂再生试剂盒                                20 次
G&VS20127       RNA 比色法定量检测试剂盒                                20 次
G&VS20129       RNA 荧光（RiboGreen）定量检测试剂盒            20 次