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考马斯亮蓝法测蛋白含量测定试剂盒说明书

发布时间：2025/5/8 19:04:26 阅读次数：12

考马斯亮蓝法测蛋白含量测定试剂盒说明书
可见分光光度法
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号: JW-C-C201-50
规格: 50T/48S

测定意义
样品可溶性蛋白质含量常常用于酶活性计算。此外，可溶性蛋白质含量也用于食品等质量分析。

测定原理
在酸性溶液中，考马斯亮蓝G-250与蛋白质结合形成蓝色复合物；该复合物在595nm处有最大吸收峰，其颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比。该方法灵敏度高，适合微量蛋白质分析。

自备仪器和用品
离心机、可见分光光度计、移液器、1mL玻璃比色皿和蒸馏水。

试剂组成和配制
试剂一：液体×1 瓶，4℃保存。
标准品：500μg/mL×1 瓶，4℃保存，临用前用蒸馏水稀释为50μg/mL。样品中可溶性蛋白质提取
1. 液体样品：澄清无色液体样品可以直接测定。
2. 组织样品：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1 ：5~ 10的比例（建议称取约 0. 1g组织，加入 1mL提取液（自备，根据需要选用酶提取缓冲液或者蒸馏水或者生理盐水）冰浴匀浆，8000g，
4℃离心10min ，取上清，即待测液。（动物样品常常需要稀释）
3. 细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~ 1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w ，超声3秒，间隔7秒，总时间 3min）；然后 8000g ，4℃ , 离心 10min ，取上清置于冰上待测。

测定操作：
1. 分光光度计预热30min ，蒸馏水调零。
2. 空白管：取1mL玻璃比色皿，加入200μL蒸馏水，1000μL试剂一，混匀后室温静置10min，于595nm比色，10~20min 完成比色，记为A空白管。
3. 标准管：取1mL玻璃比色皿，加入200μL标准液，1000μL试剂一，混匀后室温静置10min，于595nm比色，10~20min 完成比色，记为A标准管。
4. 测定管：取1mL玻璃比色皿，加入200μL待测液，1000μL试剂一，混匀后室温静置10min，于595nm比色，10~20min完成比色，记为A测定管。
注意：空白管和标准管只需要测定一次。

计算公式:
Cpr (µg/mL）=50×(A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A 空白管)
C 标准管：标准品蛋白质浓度，50μg/mL。

注意事项：
1.加考马斯亮蓝后，在10~20min 内吸光值相对较稳定，因此须在10~20min 完成比色。 2.不宜用石英比色皿，可用玻璃或塑料比色皿，测完成后立即用95%乙醇冲洗。
3.测定前用1~2个样做预实验，确保蛋白浓度在0~ 1000µg/ml 范围内，否则需要做相应稀释，使得稀释后的结果在 0~ 1000µg/ml 范围内，然后再乘以稀释倍数。

本产品仅供科学研究使用！请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途！