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γ-谷氨酰转移酶（γ-glutamyltranspeptidase）活性测定试剂盒说明书

发布时间：2025/5/8 19:22:04 阅读次数：16

本试剂盒仅供科研使用

γ-谷氨酰转移酶(γ-glutamyltranspeptidase)活性测定试剂盒
（货号：JW-G009     微板法   96 样）
一、产品简介：
γ-谷氨酰转移酶(γ-glutamyltranspeptidase ，γ-GT ，EC 2.3.2.2) ，又称γ-谷氨酰转肽酶，催化谷胱甘肽、S-取代谷胱甘肽和其它γ-谷氨酰化合物上的γ-谷氨酰基的转移；该酶广泛分布于生物体内，是谷氨酰循环中的关键酶，在氨基酸转运过程中起重要的作用，故它是反映生物体代谢的一个重要指标。
γ-GT 催化谷氨酰对硝基苯胺中γ-谷氨酰基转移给 N-甘氨酰甘氨酸，生成对硝基苯胺，通过测定对硝基苯胺在 410nm 光吸收增加速率，来计算γ-GT 酶活性大小。

二、试剂盒组成和配制：
试剂名称    规格        保存要求    备注
提取液    液体 110mL×1 瓶    4℃保存
试剂一    液体 30mL×1 瓶    4℃保存
试剂二    粉体 mg×1 瓶    -20℃保存    临用前甩几下使粉末全部落入底部，加入 4.4mL 的试剂一，混匀溶解备用。
试剂三    粉体 mg×1 支    4℃保存    临用前甩几下使粉末全部落入底部，加入 4.4mL 的试剂一，混匀溶解备用。
标准品    粉体 mg×1 支    4℃保存    若重新做标曲，则用到该试剂。

三、所需的仪器和用品：
酶标仪、96 孔板、离心机、可调式移液器、研钵、乙醇、冰和蒸馏水。

四、γ-谷氨酰转移酶(γ-GT)：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！
1 、样本制备：
① 组织样本：称取约 0. 1g 组织，加入 1mL 提取液，进行冰浴匀浆。4℃×12000rpm 离心 10min ，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1 ：5~ 10 的比例进行提取。
② 细菌/细胞样本：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 200W ，超声 3s ，间隔 10s，重复 30 次）；12000rpm 4℃离心 10min ，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（104 ）：提取液（mL）为 500~ 1000：1 的比例进行提取。
③ 液体样本：直接检测；若浑浊，离心后取上清检测。
2 、上机检测：
① 酶标仪预热 30 min 以上，调节波长到 410nm。
② 所有试剂解冻至室温（25℃) 。
③ 依次在 96 孔板中加入：

试剂名称 (μL）    测定管
试剂一    80
样本    40
试剂二    40
试剂三    40
混匀后立即于 410nm处读取 A1 值，37℃准确反应 20min

本试剂盒仅供科研使用

后读取 A2 。△A=A2-A1。
【注】若ΔA 小于 0.005 ，可增大样本量 V1（如增至 80μL ，试剂一相应减少），则改变后的 V1 需代入公式重新计算。
五、结果计算：
1 、标准曲线：y = 23.998x - 0.0074：x 为标准品(μmoL) ，y 为ΔA。
2 、按样本鲜重计算：
单位定义：在 37℃ , 每克组织每分钟催化产生 1nmoL 对硝基苯胺为一个酶活单位（U）。
γ-谷氨酰转移酶(γ-GT) (nmoL/min/g 鲜重)=[(ΔA+0.0074)÷23.998]×103÷(W×V1÷V)÷T =52.08×(ΔA+0.0074)÷W
3 、按样本蛋白浓度计算：
单位定义：在37℃ , 每毫克组织蛋白每分钟催化产生 1nmoL 对硝基苯胺为一个酶活单位（U）。
γ-谷氨酰转移酶(γ-GT) (nmoL/min/mg prot)=[(ΔA+0.0074)÷23.998]×103÷(V1×Cpr)÷T =52.08×(ΔA+0.0074)÷Cpr
4 、按细胞数量计算：
单位定义：在 37℃ , 每 104 个细胞每分钟催化产生 1nmoL 对硝基苯胺为一个酶活单位（U）。
γ-谷氨酰转移酶(γ-GT) (nmoL/min/104 cell)=[(ΔA+0.0074)÷23.998]×103÷(500×V1÷V)÷T =0. 104×(ΔA+0.0074)
5 、按照液体体积计算：
单位定义：在37℃ , 每毫升液体每分钟催化产生 1nmoL 对硝基苯胺定义为一个酶活单位（U）。
γ-谷氨酰转移酶(γ-GT) (nmoL/min/mL)=[(ΔA+0.0074)÷23.998]×103÷V1÷T =52.08×(ΔA+0.0074)

V---加入提取液体积，1 mL；             V1---加入样本体积，0.04mL；
T---反应时间，20min；                   W---样本质量，g；
500---细胞数量
Cpr---样本蛋白质浓度，mg/mL ，建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。附：标准曲线制作过程：
1      制备标准品母液（10μmol/mL）：临用前甩几下或离心，使粉体落入底部，加入 0. 1mL 乙醇，涡旋震荡溶解后再加入 0.9mL 的蒸馏水混匀，得到 10μmol/mL 备用。
2      用蒸馏水把母液稀释成以下浓度：0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1μmol/mL 。也可根据实际来调整浓度。 3     40μL 标准品+160μL 试剂一，混匀后于 410nm 处读取 A 值，依据结果即可制作标准曲线。