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超氧阴离子清除能力试剂盒说明书（邻苯三酚法）

发布时间：2025/5/16 11:09:28 阅读次数：10

本试剂盒仅供科研使用

超氧阴离子清除能力试剂盒说明书(邻苯三酚法)

一、产品简介：
超氧阴离子自由基作为生物体代谢过程中产生的一种自由基，可攻击生物大分子，引起细胞结构和功能的破坏，与机体衰老和病变有很密切的关系，清除超氧阴离子自由基的研究已经得到了广泛的关注。
在弱碱性条件下，邻苯三酚能发生自氧化反应产生超氧阴离子和有色中间产物，该中间产物在 320nm 处有特征吸收峰。当加入超氧阴离子清除剂时，它能迅速与超氧阴离子反应从而阻止中间产物的积累，使溶液在 320nm处光吸收减弱。故可以通过测定 A320 值来评价清除剂对超氧阴离子的清除能力。

二、试剂盒组分与配制：
试剂名称        规格                   保存要求    备注
试剂一    液体 45mL×1 瓶      4℃保存
试剂二    粉剂mg×2 支            4℃保存    临用前甩几下，使粉剂落到底部，每支再加 1. 1mL 蒸馏水充分溶解。
试剂三    液体 2mL×1 支         4℃保存

三、所需的仪器和用品：
酶标仪、96 孔板、可调式移液器、天平、离心机。

四、超氧阴离子清除能力的测定：
1 、样本制备：
① 组织样本：称取 0. 1g 样本 (若是干样可取 0.02-0.05g) ，加入 1mL 的 80%乙醇 (自备)进行匀浆，匀浆后转入 2mL 离心管中；于 50℃，200-300W 条件下超声提取 30min
(间隔 5min 振荡混匀一次) 。若有损耗需用 80%乙醇定容至 1mL ，12000rpm 室温离心 10min ，取上清待测。
② 液体：直接检测；若浑浊，离心后取上清检测。
2 、上机检测：
① 酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 320nm，试剂一和二需于室温(25℃)预热20min。
② 在 96 孔板中依次加入下列试剂：
试剂名称(μL)    测定管    对照管    空白管 (仅做一次)
试剂一              200   200         200
                室温 (25℃) 孵育 20min
样本          10           10
蒸馏水           20            10
试剂二               20                               20
               室温 (25℃) 孵育 5min
试剂三                10          10          10
混匀，3min 后于 320nm 处读取各管吸光值 A。
【注】：1.不同样本清除能力不一，可先选取 2 个样本做检测，若 A 空白大于 1.5 可缩短反应时间
(如由 5min 减至 2min )；
2.若 A 测定减 A 对照的差值大于空白管，需增加样本加样量 (如由 10μL 增至 40μL ，则试剂一相应减少)；若 A 测定减 A 对照的差值小于 0. 1 ，需对样本用 80%乙醇稀释后再检测。

五、结果计算：
超氧阴离子清除率 I%=[1-(A 测定-A 对照)÷A 空白]×100%