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鸡低分子肝素（LMWH）酶联免疫分析试剂盒使用说明书

发布时间：2025/5/19 22:08:42 阅读次数：7

鸡低分子肝素(LMWH)酶联免疫分析试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

检测范围：1pg/ml-70pg/ml

使用目的：
本试剂盒用于测定鸡血清、血浆及相关液体样本中低分子肝素(LMWH)含量。

实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中鸡低分子肝素(LMWH)水平。用纯化的鸡低分子肝素(LMWH)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入低分子肝素 (LMWH)，再与 HRP 标记的低分子肝素(LMWH)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的低分子肝素(LMWH)呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中鸡低分子肝素(LMWH)浓度。
试剂盒组成

1、30 倍浓缩洗涤液    20ml×1 瓶        7、终止液        6ml×1 瓶
2、酶标试剂    6ml×1 瓶        8、标准品（120pg/ml）    0.5ml×1 瓶
3、酶标包被板    12 孔×8 条    9、标准品稀释液    1.5ml×1 瓶
4、样品稀释液    6ml×1 瓶        10、说明书    1 份
5、显色剂 A 液    6ml×1 瓶        11、封板膜    2 张
6、显色剂 B 液    6ml×1/瓶        12、密封袋    1 个
标本要求
1 ．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤
1.     标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
60pg/ml    5 号标准品    150μl 的原倍标准品加入 150μl 标准品稀释液
30pg/ml    4 号标准品    150μl 的 5 号标准品加入 150μl 标准品稀释液
15pg/ml    3 号标准品    150μl 的 4 号标准品加入 150μl 标准品稀释液
7.5pg/ml    2 号标准品    150μl 的 3 号标准品加入 150μl 标准品稀释液
3.75pg/ml    1 号标准品    150μl 的 2 号标准品加入 150μl 标准品稀释液
2.     加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50μl，待测样品孔中先加样品稀释液 40μl，然后再加待测样品 10μl（样品最终稀释度为 5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.     温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
4.     配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用
5.     洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复 5 次，拍干。
6.     加酶：每孔加入酶标试剂 50μl ，空白孔除外。
7.     温育：操作同 3。
8.     洗涤：操作同 5。
9.     显色：每孔先加入显色剂 A50μl ，再加入显色剂 B50μl ，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
10 分钟.
10.   终止：每孔加终止液 50μl ，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.   测定：以空白孔调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。

计算
以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的 OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

注意事项
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 1 小时后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2 ．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3 ．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4 ．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本 OD 值大于标准品孔第一孔的OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数 ( ×n×5）。
5 ．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6 ．底物请避光保存。
7 ．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8 ．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9 ．本试剂不同批号组分不得混用。

保存条件及有效期
1 ．试剂盒保存：；2-8℃。
2 ．有效期：6 个月