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诺氟沙星快速检测试剂盒使用说明书

发布时间：2025/5/21 11:14:15 阅读次数：8

诺氟沙星快速检测试剂盒使用说明书

【原理】
试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在微孔条上预包被偶联抗原，样本中的残留物诺氟沙星和微孔条上预包被的偶联抗原竞争抗诺氟沙星抗体，加入酶标记物后，用TMB 底物显色，样本吸光值与其所含残留诺氟沙星的含量成负相关，与标准曲线比较即可得出相应残留物诺氟沙星的含量。

【试剂盒技术指标】规       格：96 孔/盒    灵敏度： 0.1ppb
检测时间： 45min     样本定量检测下限：
组   织………………………………………0.1ppb
蜂   蜜………………………………………0.2ppb
血   清………………………………………0.2ppb
样本回收率
组   织…………………………………80±15%
血   清…………………………………80±15%
蜂    蜜 … … … … … … … … … … … … 75±15%
诺氟沙星反应率
诺氟沙星（ENR） ………………………100%

【试剂盒组成】
1 、微量测试孔：每条 8 孔，一板 12 条
2 、标准液×6 瓶：（1ml/瓶） 0ppb 、0.1ppb 、0.3ppb 、0.9ppb 、2.7ppb、8.1ppb
3 、高浓度标准品溶液×1 瓶：（1ml/瓶）100ppb
4 、酶标记物               7ml……………………………红色帽
5 、抗体工作液          7ml……………………………绿色帽
6 、底物 A 液              7ml……………………………棕色帽
7 、底物 B 液              7ml……………………………黑色帽
8 、终止液                  7ml……………………………黄色帽
9 、 20X 浓缩洗涤液 40ml ……………………………白色帽
10 、    2X 浓缩复溶液   50 ml ……………………………蓝色帽
【所用仪器、试剂】
具备的仪器：微孔酶标仪、打印机、均质器、氮气吹干装置、振荡器、离心机、刻度移液管、天平（感量 0.01g）
微量移液器：单道 20µl-200µl 、100µl-1000µl，多道 250µl
试          剂：浓盐酸、二氯甲烷、正己烷、乙腈、肝素钠
Na2 HPO4   · 12H2O 、NaH2 PO4   ·2H2O、

【实验前溶液配制】
样本处理前需配制：
配液 1 、0.1M HCL 溶液
860µl 浓盐酸加去离子水 100ml 溶解。配液 2 、乙腈-0.1MHCL 溶液
V 乙腈：V0.1M – HCL ＝ 84 ：16
配液 3 、乙腈-二氯甲烷混合溶液
V 乙腈-V 二氯甲烷 = 1 : 4
配液 4 、pH7.2 0.05M PB 缓冲液
12.9gNa2 HPO4   · 12H2O+2.175gNaH2 PO4   ·2H2O 加去离子水 1L 溶解。
配液 5 、pH7.2   0.02MPB 缓冲液
5.16gNa2 HPO4   · 12H2O+0.87g NaH2 PO4   ·2H2O加去离子水 1L 溶解。
配液 6 、用去离子水将 2X 浓缩复溶液按 1 ：1 稀释
（1 份浓缩复溶液+1 份去离子水）用于样本复溶。
配液 7 、将 40ml 浓缩洗涤液（20 倍浓缩）用去离子水按照 1 ：19 稀释（1 份浓缩洗涤液+19 份去离子水），或按所需用量配制洗涤液。

【样本前处理方法】
样本前处理须知：处理任何样本时，都必须注意：
（a）本试剂盒所检测的组织样本包括：动物组织、   禽类和水产组织。eg:鸡、鸭、牛、兔、鱼、虾等。
（b）实验中必须使用一次性吸头，在吸取不同的试剂时要更换吸头。
（c）实验之前须检查各种实验器具是否干净，必要时可对实验器具进行清洁，以避免污染干扰实验结果。样本前处理步骤
（a）组织样本（鸡肉/肝、猪肉/肝、虾、鱼等）
1 、称 2.0±0.05g 均质的组织样本于 50ml 离心管中；
2 、加入乙腈-二氯甲烷混合溶液 8ml，振荡 5min，4000r/min 以上， 15℃离心 10min；
3 、取 4ml 上层清澈有机相至干燥溶器中，56℃氮气吹干/旋转蒸发至干；
4 、用 1ml 稀释后的复溶液溶解干燥的残留物，加入正己烷 1ml 混合 30s，4000r/min 以上，15℃离心 5min；
5 、去除上层取下层 50µl 液体用于分析。样本稀释倍数：1
（b）血清样本的处理
1 、用加有肝素钠（20-30 单位/ml 血）的离心管采集血样本（建议采血注射器也用肝素钠润洗），血样本室温静置 1h，待析出血浆后
4000r/min 以上，15℃离心 10min，取出血浆 1ml；
2 、加入乙腈（无水）4ml 上下充分混合 5min，4000r/min 以上，15℃离心 10min；
3 、移上清至另一离心管中，加入 2ml 0.02M PB 缓冲液，混匀；
4 、加入二氯甲烷 5ml，充分混匀 5min，4000r/min ，15℃离心 10min，去上层，取下层有机相到干燥瓶
中（清亮无杂质），50℃旋转蒸发至干/氮气吹干； 5 、用 1ml 稀释后的复溶液溶解干燥的残留物，加入正
己烷 1ml 混合 30s，4000r/min 以上，离心 5min；
6 、轻吸掉上层和中间白色杂质，取下层相 100µl 加入 100µl 稀释后的复溶液，混合 30s；
7 、取 50µl 用于分析。样本稀释倍数：2
（c）蜂蜜
1 、取 1g 蜂蜜，加 6 ml 乙腈-0.1MHCL 溶液振荡至蜂蜜全部溶解；
2 、加入 3 ml 0.05M PB 缓冲液，加入 11ml 二氯甲烷，振荡 5min ， 4000r/min 以上离心 5min；
3 、轻吸掉上层，取下层有机相 8 ml 至干燥溶器中，56℃氮气吹干；
4 、用 1ml 稀释后的复溶液溶解干燥的残留物，再加入正己烷 1ml 混合 30s，3000r/min 以上，15℃离心 5min；
5 、去除上层取下层 50µl 液体用于分析。稀释倍数：2
注：在使用国家规定最高残留限量（100ppb）进行判定时，需进
行 10 倍稀释（1 份样本液+9 份已稀释好的复溶液）。

【酶标免疫分析程序】操作步骤：
1 、将试剂盒从冷藏环境中取出并将所需试剂从试剂盒取出，置室温    （20-25℃ ) 平衡 30min 以上, 注意每种液体试剂使用前均须摇匀。
2 、按需要取出微孔条及板架，将不用的微孔板重新密封，保存于 2- 8℃ ,   不要冷冻。
3 、编号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品均需做 2 孔平行，并记录标准孔的样本孔所在的位置。
4 、加标准品/样本 50µl /孔，然后加入 50µl/孔酶标记物；再加入 50µl/孔抗体工作液。轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板，25℃环境反应
30min。
5 、取出用洗涤液按每孔 250 μ l 洗板 4-5 次，每次浸泡 15-30 秒，拍干（拍干后未被清除的气泡可用干净的枪头刺破）。
6 、显色：每孔加入底物液 A 液 50µl 再加 B 液 50µl，轻轻振荡混匀， 25℃环境避光显色 15min。
7 、测定：每孔加入终止液 50µl，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于 450nm   处（建议用双波长 450/630nm 检测在 5min 内读完数据），测定吸光度值（OD 值）。

【结果判定】
结果判定有两种方法，粗略判定可用第 1 种方法，定量判定用第 2 种方法。注意样本吸光值与诺氟沙星的含量成负相关。
1 、粗略判定
用样本的平均吸光度值与标准品比较即可得出其浓度范围(ng/ml)。假设样本 1 的吸光度值为 0.238，样本 2 的吸光度值为 0.946，标准液吸光度值分别是：0ppb 为 1.845； 0.1ppb 为 1.542；0.3ppb 为 1.130；
0.9ppb 为 0.635 ；2.7ppb 为 0.326； 8.1ppb 为 0.156。则样本 1 的浓度范围是 2.7ppb-8.1ppb；样本 2 的浓度范围是 0.3ppb-0.9ppb。乘以其对应的稀释倍数即为样本中诺氟沙星的实际浓度。
2 、定量分析
（1）百分吸光率的计算，标准品或样本的百分吸光率等于标准品或样本的百分吸光度值的平均值（双孔）除以第一个标准（0 标准）的吸光度值，再乘以 100%，即
百分吸光度值（%） =
B—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值 B0—0ng/ml 标准溶液的平均吸光度值
（2）标准曲线的绘制与计算
以标准品百分吸光率为纵坐标，以诺氟沙星标准品浓度（ng/ml）的半对数为横坐标，绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中诺氟沙星的实际浓度。
若利用试剂盒专业分析软件进行计算，更便于大量样本的准确、快速分析。（欢迎来电索取）
3 、标准准曲线：B/B0 (%)
4 、再现性：
由多个不同的实验结果确定了精密度，图 2 显示出诺氟沙星检测试   剂盒的精密度情况，获得的标准吸收值的变异系数（%CV）对相应诺氟沙星浓度作曲线，可以看到在全部范围内变异系数如此之低，可以得到很好的再现性。
【注意事项】
6 、使用前将所有试剂温度回升至室温 20-25℃ 。试剂及标本没有回到室温（20-25℃ ) 会导致所有标准的 OD 值偏低。
7 、在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会伴随着出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。
8 、混合要均匀，否则会出现重复性不好的现象。
9 、反应终止液为 2M 硫酸，避免接触皮肤。
10 、    不要使用过了有效日期的试剂盒，稀释或搀杂使用会引起灵敏度、OD 值的变化。不要交换使用不同批号的盒中试剂。
11 、    不用的微孔板放进自封袋密封；标准物质和无色的发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。
12 、    显色液若有任何颜色表明变质，应当弃之。0 标准的吸光度值小于 0.5 个单位（A450nm< 0.5 ）时，表示试剂可能变质。
13 、    该试剂盒最佳反应温度为 25℃ ,   温度过高或过低将导致检测吸光度值和灵敏度发生变化。

【储存】
原包装应储存于 2～8℃保鲜冷藏，切勿冷冻。

【有效期】
有效期 12 个月;生产日期、有效期、生产批号见外包装。