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牛 TdT 牛末端脱氧核糖核苷转移酶， 14 U/μL

发布时间：2025/5/21 13:46:07 阅读次数：17

CAT#:JW-11-T220745 低温运输，-20℃保存
牛 TdT 牛末端脱氧核糖核苷转移酶， 14 U/μL

产品及特点
本产品催化 dNTP 聚合于单链或双链 DNA 的 3’-OH 末端的反应，该反应不需要模板，但引物必须是至少有 3 个以上碱基的寡核苷酸。本产品的用途包括通过 Okayama-Berg 法给载体或 cDNA 加上互补同聚尾，以及使用 dNTP、 ddNTP 来标记 DNA 的 3’末端。本产品仅应用于科研。

规格及成分
本产品使用塑料袋包装
成分            编号        规格    包装
末端脱氧核苷酸转移酶    11-T220745a    300 U    1.5 mL 白色盖
5×末端脱氧核苷酸转移酶缓冲液    11-T220745b    1 mL    1.5 mL 本色盖
0.1%牛血清白蛋白        11-T220745c    1 mL    1.5 mL 红色盖
使用手册            11-T220745sc    1份    无
5×末端脱氧核苷酸转移酶缓冲液的配方是：500 mM HEPES ，pH 7.2 ，40    mM 氯化镁，0.5 mM DTT 。（该缓冲液含有在 DNA 3’末端添加 dNTP 实验的主要成分）
活性定义：以 DNase 处理后的热变性小牛胸腺 DNA 为起始物，37℃, pH 7.2 的条件下， 1 小时内使 1 nmol 的[3H]dTTP 掺入酸不溶性沉淀物所需的酶量定义为 1 个活性单位(unit)。
活性定义反应液： 100 mM 二甲胂酸钠 pH 7.2 ，8 mM 氯化镁，0.1 Mm
DTT ，0.024%牛血清白蛋白， 160 μg/mL 激活的小牛胸腺 DNA ，0.5 mM [3H]dTTP。
酶贮存溶液：60 mM 磷酸钾 pH 7.2， 150 mM 氯化钾， 1 mM DTT ，50%甘油。

运输及保存：低温运输，-20℃保存，有效期 12 个月。
自备物品：DNA ，NaCl ，EDTA ，灭菌水，苯酚/氯仿/异戊醇，无水乙醇

使用方法    1.   按下表设置反应体系。
    成分        用量
自备的 DNA        4-5 pmol(3’-termini)
5×末端脱氧核苷酸转移酶缓冲液    10 μL
0.1%牛血清白蛋白        5 μL
自备的 dGTP（脱氧鸟苷三磷酸）    0.05-0.5 mM（终浓度）
TdT（末端脱氧核苷酸转移酶）    10-15 U
自备的灭菌水        到 50 μL
2.   37℃反应 30 分钟。
3.   加入 5 μL 自备的 5 M NaCl 和 1 μL 的 0.5 M EDTA（pH 8.0）。
4.   加入 50 μL 自备的（等量）的苯酚/氯仿/异戊醇（25：24： 1），充分
5.   混匀，再用冷的自备无水乙醇沉淀 DNA。
注：影响反应的因素有：添加的碱基种类(dATP，dTTP，dCTP，dGTP)，缓冲液中的二价阳离子(Mg2+ ，Mn2+ ，Co2+) ，DNA 末端结构(3’-OH 突出末端，平末端，3’-OH 凹陷末端)。因此，每个反应都需要摸索最适条件。
关联产品：E.coli DNA 连接酶，60U/μL