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内源性一氧化碳（CO）测试盒说明书（测血清、血浆）

发布时间：2025/5/21 13:54:12 阅读次数：19

内源性一氧化碳(CO)测试盒说明书( 测血清、血浆)

一、实验仪器：试管、微量移液器、旋涡混匀器、可见分光光度计(568 和 581nm)
二、适用范围：本试剂盒可测各种动物血清(浆)等样本中内源性一氧化碳；

三、测定意义：
一氧化碳(carbon monoxide，CO)是与一氧化氮(NO)极相似的小分子气态物质。90 年代以来的大量研究揭示，生物体内源性 CO 不仅作为一种新型的神经递质参与中枢神经系统的信息传递，还具有舒张血管、抑制血管平滑肌和血管内膜增殖、抑制血小板聚集、调节体内激素分泌、抑制细胞凋亡等多种生物学功能，在机体多种生理及病理状态中发挥重要的作用。

四、操作过程
1、血清(浆)中血红蛋白 Hb 测定及计算：
取 0.05ml 样本(血清、血浆)与 2.5ml 的血红蛋白测定应用液(即将试剂五的浓缩液进行 100 倍稀释)，混匀，静置 5 分钟后，1cm 光径蒸馏水调零，540nm 测定各管吸光度值。
2、样本前处理：
①、制备溶血液：取抗凝全血 0.01ml，加入试剂一溶血剂 1.2ml 混匀，静置 5 分钟，使溶血完全。
②、制备测定样本：取制备好的溶血液 0.1ml，加待测血浆 0.1ml，混合后制备成测定样本。
③、制备对照样本：取制备好的溶血液 0.1ml，加双蒸水 0.1ml，混合后制备成对照样本。
3、血清(浆)中碳氧血红蛋白测定：
加入物                测定管    对照管
经过前处理的血浆测定样本 (ml)        0.2ml
经过前处理的血浆对照样本 (ml)            0.2ml
试剂三碳氧血红蛋白测定工作液(ml)    2.3ml    2.3ml
混匀，静置 10 分钟后，试剂二缓冲液调零，1cm 光径，分别测各管 568nm 与 581nm 的吸光度，计算每只样本的绝对吸光度值。

五、计算公式：
〇碳氧血红蛋白百分浓度(HbCO%)的计算：
通过分别测定 568nm与 581nm的吸光度，计算△OD(A568-A581 ) 的绝对吸光度值差。再由标准曲线，通过回归方程计算出碳氧血红蛋白百分比浓度，即HbCO%。
x即为△OD(A568-A581 )的绝对吸光度值，y即为碳氧血红蛋白百分比浓度 HbCO%=[ 0.822×△OD(A568-A581 )+0.001 ]×100%
〇血清/血浆中 Hb 的测定步骤及计算公式：
血红蛋白含量的计算：血红蛋白克数/ 升 = 540nm处吸光度值 ×73.54 〇血浆中一氧化碳(CO)含量的计算公式：
绝对吸光度△OD值 = 测定管△OD(A568-A581 ) —对照管△OD(A568-A581 )
通过回归方程计算 HbCO%=[ 0.822×绝对吸光度△OD 值+0.001 ]×100%
血浆中一氧化碳(CO)含量   HbCO% × Hb(g/L)×106 × 4
(μmol/L)                   64456
【注】64546 为 Hb 分子量； 4 表示一个 Hb 结合四个 C