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土壤β-葡萄糖苷酶（S- β-GC）活性检测试剂盒说明书微量法

发布时间：2025/7/2 15:02:47 阅读次数：22

土壤β-葡萄糖苷酶（S- β-GC）活性检测试剂盒说明书微量法

注意：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。
规格：100T/48S

产品简介：
S-β-GC 能够催化水解芳基或烃基与糖基原子团之间的糖苷键生成葡萄糖，是纤维素分解酶系中重要组成成分之一，在土壤微生物的糖类代谢方面具有重要生理功能。
S-β-GC 能够催化对-硝基苯- β-D 吡喃葡萄糖苷生成对-硝基苯酚，产物略显黄色，在 400nm 有特征光吸收。

试验中所需的仪器和试剂：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、冰、甲苯（不允许快递）和蒸馏水。

产品内容：
试剂一：甲苯 5mL× 1 瓶，4℃保存；（自备）
试剂二：粉剂× 1 瓶，-20℃保存；临用前每瓶加入 13mL 蒸馏水，充分溶解备用，用不完的试剂仍-20℃保存；
试剂三：液体 30mL× 1 瓶，4℃保存；
试剂四：液体 20mL× 1 瓶，4℃保存；
标准品：液体× 1 支，5mmol/L 的对硝基苯酚溶液。

标准样品的准备：
取 100μL 标准液，加入到 400μL 试剂三中，得到 1mmol/L 标准液，十倍稀释到 100 μmol/L，用蒸馏水倍比稀释：50 、25 、12.5 、6.25μmol/L 。100 、50 、25 、12.5 、6.25μmol/L 做标准液。
操作步骤：
1 、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 400nm ，蒸馏水调零。
2 、加样表

试剂名称        测定管    对照管    标准管    空白管
风干土样（g）    0.02    0.02    -    -
试剂一 (μL）    10    10    -    -
振荡混匀，使土样全部湿润，室温放置 15min
试剂二(μL）    130    -    -    -
试剂三(μL）    160    160    -    -
混匀，37℃水浴 1h 后，立即沸水浴煮沸 5min（盖紧，防止水分散失），流水冷却
试剂二(μL）    -    130    -    -
充分混匀，10000g 常温离心 10min ，取上清液
上清液(μL）    70    70    -
标准液(μL）    -    -    70
蒸馏水(μL）    -    -    -    70
试剂四(μL）    130    130    130    130
充分混匀，室温静置 2min后，测定吸光值 A ，计算ΔA=A 测定管-A 对照管。每个测定管设一个对照管。
标准曲线建立：根据标准管的浓度（y）和吸光度ΔA=A 标准管-A 空白管（x ），建立标准曲线。
S-β-GC 活力的计算：
根据标准曲线，将ΔA（x ）带入公式计算样品浓度(μmol/L）。
单位的定义：每天每 g 土样中产生 1μmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。 S-β-GC 活力（U/g 土样）＝y ×V 反总÷W÷T=0.36×y
T：反应时间，1h= 1/24d；V 反总：反应体系总体积：3 × 10-4L；W：样本质量，0.02g。