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土壤亮氨酸氨基肽酶（S-LAP）活性检测说明书

发布时间：2025/7/2 15:03:45 阅读次数：19

注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
规格：100T/48S

产品内容：
试剂一：液体30mL×1瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1瓶，4℃避光保存；临用前加入3mL丙酮溶解。

产品说明：
S-LAP是一类能水解肽链N-末端为亮氨酸的酶，由土壤微生物分泌。S-LAP活性变化与机体某些病理状态密切相关。
S-LAP分解L-亮氨酸对硝基苯胺生成对硝基苯胺，后者在405nm有最大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算S-LAP活性。

自备实验用品及仪器：
天平、离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、甲苯、丙酮、30目筛（或更小）。

操作步骤：
一、样本处理
土样自然风干，过30-50目筛。
二、测定步骤
1 、分光光度计/酶标仪预热30min以上，波长调至405nm ，蒸馏水调零。
2 、加样表：
    测定管        对照管
土样（g）    0.03        0.03
甲苯 (µL）    15        15
震荡混匀，室温静置15min。
试剂一 (µL）    255    255
试剂二 (µL）    30    -
30℃水浴反应1h后立刻煮沸5min 。流水冷却至室温。
试剂二 (µL）    -    30
14000g 常温离心10min ，取200µL上清于405nm处测定吸光值，分别记为A测定管、A对照管，计算∆A=A测定管-A对照顾管。

三、酶活计算公式
1.          按微量比色皿计算：
酶活性定义：每克土壤每分钟生成1nmol 对硝基苯胺为一个酶活力单位。
S-LAP 活性（U/g）=△A÷(ε×d) ×109 ×V反总÷W÷T=0.507×△ A÷W 。
ε ：对硝基苯胺摩尔消光系数：9.87×103 L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V 反总：反应总体积，300µL=3×10-4 L；W：土样质量，g；T：反应时间，60min；109 ：单位换算系数，1mol= 109nmol。
2.          按96孔板计算：
酶活性定义：每克土壤每分钟氧化1nmol 对硝基苯胺为一个酶活力单位。
S-LAP 活性（U/g）=△A÷(ε×d) ×109 ×V反总÷W÷T=0.844×△ A÷W 。
ε：对硝基苯胺摩尔消光系数：9.87×103 L/mol/cm；d：96 孔板光径，0.6cm；V 反总：反应总体积，300µL=3×10-4 L；W：土样质量，g；T：反应时间，60min；109 ：单位换算系数，1mol= 109nmol。