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总巯基含量检测试剂盒说明书微量法

发布时间：2025/7/2 15:07:48 阅读次数：23

总巯基含量检测试剂盒说明书微量法

注意：正式测定之前选择2-3 个预期差异大的样本做预测定。
规格：100T/48S

产品内容：
提取液：液体 60 mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：液体 20 mL×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体 1 mL×1 支，4℃避光保存。
标准品：粉剂×1 支，10mg 还原型谷胱甘肽（GSH）。临用前加入 1.3mL 蒸馏水，浓度为 25µmol/mL，取一部分稀释成 0.5µmol/mL 待测，其余 4℃保存。

产品说明：
生物体内巯基主要包括谷胱甘肽巯基和蛋白质巯基。前者不仅能够修复氧化损伤的蛋白质，而且参与活性氧清除，后者对于维持蛋白质构象具有重要作用。通过测定总巯基含量和 GSH 含量，能够间接测定蛋白质巯基含量。
巯基基团与 5,5’-二硫代-双-硝基苯甲酸（DTNB）反应，生成黄色化合物，在 412nm 处有最大吸收峰。
自备实验用品：
天平、研钵、恒温水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板和蒸馏水。

操作步骤：
一、样品的制备：
（1）动物、植物组织：称取约 0.1g，加入 1mL 的提取液，制备成 10%的匀浆，8000g，常温离心10min，取上清待测。
（2）血清，培养液：直接测定。二、测定步骤：
1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 412nm，蒸馏水调零。
2、操作表
        对照管    测定管    标准管    空白管
样品（μL）    40    40
标准品（mL）            40    40
试剂一（μL）    150    150    150    150
试剂二（μL）        10    10
H2O（μL）    10            10
混匀，室温 10min，双蒸水调零，微量玻璃比色皿/96 孔板，测定 412nm 吸光值，分别记为 A 对照、A 测定、A 标准、A 空白。

三、计算公式：
1、组织：
（1）按样本鲜重计算
总巯基含量（μmol/g 鲜重）=0.5×（A 测定-A 对照）÷（A 标准- A 空白）×V 样总÷W
=0. 5×（A 测定-A 对照）÷（A 标准- A 空白）÷W
（2）按样本蛋白浓度计算
总巯基含量（μmol/mg prot）= 0.5×（A 测定-A 对照）÷（A 标准- A 空白）÷Cpr 2、血清、培养液：
总巯基含量（μmol/L）=0.5× (A 测定-A 对照)÷(A 标准- A 空白) ×1000
=250×（A 测定-A 对照）÷（A 标准- A 空白）
0.5：标准品还原型谷胱甘肽的浓度，µmol/mL； V 样总：加入提取液体积，1mL；W：样品质量，g ；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；1000：单位换算系数，1L=1000mL。