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发布时间:2025/7/2 15:16:03 阅读次数:35
植物组织果糖(FT)含量检测试剂盒说明书微量法
注意:正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。
规格:100T/96S
产品内容:
提取液:液体 100mL×2 瓶,4℃保存;
试剂一:5mg/mL 标准液 1mL× 1 瓶,4℃保存;
试剂二:液体 25mL× 1 瓶,4℃保存;
试剂三:液体 6mL× 1 瓶, 4℃保存;
试剂四:粉剂 0.5g× 1 瓶,常温保存。
产品说明:
果糖是一种最为常见的己酮糖,是葡萄糖的同分异构体,以游离状态大量存在于水果的浆汁和 蜂蜜中,能与葡萄糖结合生成蔗糖。果糖是最甜的单糖,广泛应用于食品、医药、保健品生产中。
在酸性条件下果糖与间苯二酚反应,生成有色物质,在 480nm 下有特征吸收峰。
所需的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、研钵、蒸馏水。
操作步骤:
一、果糖提取:
称取约 0. 1g 样本,常温研碎;加入 1mL 提取液,适当研磨后快速转移到有盖离心管中;置于 80℃水浴锅中 10min(盖紧,以防止水分散失),振荡 3~5 次,冷却后,4000g ,常温离心 10min , 取上清;加入少量(约 2mg)试剂四,80℃脱色 30min(盖紧,以防止水分散失);再加入 1mL 提 取液,4000g ,常温离心 10min ,取上清液测定。
二、测定步骤
1 、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 480nm ,蒸馏水调零。
2、样本测定,(在 1.5mL EP 管中依次加入下列试剂):
试剂(μL) 空白管 标准管 测定管
样本 30
试剂一 30
蒸馏水 30
试剂二 210 210 210
试剂三 60 60 60
混匀,80℃水浴内反应 10min(盖紧,以防止水分散失),冷却后取 200μL 至微量玻璃比色皿或 96 孔板中测定 480nm处光吸收值,记为 A 空白管、A 标准管、A 测定管,并计算△A 测定=A 测定管 -A 空白管、△A 标准=A 标准管-A 空白管。
三、果糖含量计算:
1 、果糖含量(mg/mg prot)= C 标× △A 测定÷ △A 标准×V 样总÷(Cpr×V 样总) = 5 × △A 测定÷ △A 标准÷Cpr
2 、果糖含量(mg/g 鲜重)= C 标× △A 测定÷△A 标准×V 样总÷W
= 10× △A 测定÷ △A 标准÷W
C 标准管:标准管浓度,5mg/mL;V 样总:加入提取液体积,2mL; Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL; W:样本鲜重,g。
注:如果测定管的OD 值大于 0.4 ,请用提取液稀释样品。
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