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甘油三酯（TG）含量检测试剂盒说明书微量法

发布时间：2025/7/2 15:17:08 阅读次数：28

甘油三酯（TG）含量检测试剂盒说明书微量法

注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
规格：100T/96S

产品内容：
试剂一：自备，取玻璃空瓶，加入 60mL 正庚烷，60mL 异丙醇，盖紧后混匀，4℃保存。试剂二：液体 3mL×1 瓶，4℃保存。
试剂三：液体 10mL×1 瓶，4℃保存。
试剂四：液体 3mL×1 瓶，4℃避光保存。试剂五：液体 10mL×1 瓶，4℃避光保存。试剂六：液体 10mL×1 瓶，4℃避光保存。
标准品：粉剂×1瓶，临用前加 5mL 试剂一，即 1mg/mL 甘油三酯标准溶液，4℃保存。

产品说明：
TG 是长链脂肪酸和甘油形成的脂肪分子，不仅是细胞膜的主要成分，也是重要呼吸底物。测定原理：用异丙醇抽提取 TG，KOH 皂化 TG 后水解生成甘油及脂肪酸，过碘酸氧化甘油生成甲醛，在氯离子存在下甲醛与乙酰丙酮缩合生成黄色物质，在 420 nm 有特征吸收峰，其颜色的深浅与 TG 含量成正比。

自备仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、微量比色皿/96 孔板、水浴锅、可调式移液枪、双蒸水、125mL 玻璃空瓶。

操作步骤:
一、TG 的提取：
1 、组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~ 10的比例（建议称取约0. 1g组织，加入1mL 试剂一）进行冰浴匀浆，8000g ，4℃离心10min ，取上清待测。
2 、细胞、细菌：先收集 400-500 万细胞或细菌到离心管内，弃上清，加 1mL 试剂一，超声波破碎 1min（强度 20％，超声 2s，停 1s），8000g ， 4℃离心 10min ，取上清待测。
3 、血清（浆）等液体样品：直接测定。

二、测定操作：
1.    分光光度计/酶标仪预热 30min ，调节波长到 420 nm ，蒸馏水调零。
2.    水浴锅预热到 65℃。
        空白管    标准管    测定管
双蒸水 (µL）    40
标准液 (µL）        40
TG 待测液 (µL）            40
试剂一 (µL）    125    125    125
试剂二 (µL）    25    25    25
加试剂一后充分混匀，再加试剂二，剧烈振荡 30s ，静置，待分层后取上层溶液 15µL ，置于新的 EP 管中。
3.    甘油三酯含量测定：
        空白管    标准管    测定管
上层溶液 (µL）    15    15    15
试剂三 (µL）    50    50    50
试剂四 (µL）    15    15    15
充分混匀，65℃水浴 3min
试剂五 (µL）    50    50    50
试剂六 (µL）    50    50    50
充分混匀，65℃水浴 15min
转移至微量比色皿/96 孔板测定 420nm 处吸光度，记为 A 空，A 标和 A 测。注意：空白管和标准管只需测定一次。

三、计算公式：
1. 血清（浆）中甘油三酯含量：
TG 含量（mg/dL）=C 标准品×（A 测－A 空）÷（A 标－A 空） =（A 测－A 空）÷（A 标－A 空）
C 标准品：1mg/mL；100：单位换算系数，1dL= 100 mL。
2. 组织中甘油三酯含量：
(1) 按样本蛋白浓度计算
TG 含量（mg/ mg prot）= C 标准品×V×（A 测－A 空）÷（A 标－A 空）÷（Cpr×V） =（A 测－A 空）÷（A 标－A 空）÷ Cpr
(2) 按样本鲜重计算
TG 含量（mg/ g 鲜重）=C 标准品×V×（A 测－A 空）÷（A 标－A 空）÷W =（A 测－A 空）÷（A 标－A 空）÷ W
C 标准品：1mg/mL ；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g；V：加入试剂一的体积， 1mL。
3. 细胞、细菌中甘油三酯含量：
TG 含量（mg/104 cell）=C 标准品×（A 测－A 空）÷（A 标－A 空）÷细菌或细胞密度 =（A 测－A 空）÷（A 标－A 空）÷细菌或细胞密度
C 标准品：1mg/mL；细菌或细胞密度：104 cell /mL。

注意事项：
1.   试剂盒中有易挥发性物质，实验过程中需佩戴手套和口罩，试剂瓶盖打开后应该及时盖紧。
2.   加试剂二后需剧烈震荡，使待测液中甘油三酯得到充分提取。
3.   最低检出限为 100µ mol/L。