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葡萄糖含量检测试剂盒说明书微量法

发布时间：2025/7/2 15:20:47 阅读次数：30

葡萄糖含量检测试剂盒说明书微量法
注意：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。
规格： 100T/96S

产品内容：
试剂一：葡萄糖 9mg× 1支，4℃保存；临用前加入1ml蒸馏水充分溶解为50μmol/mL 葡萄糖溶液，用蒸馏水稀释为 0.5μmol/mL 葡萄糖溶液-20℃ 保存；
试剂二：液体 10mL× 1 瓶，4℃保存；
试剂三：液体 10mL× 1 瓶，4℃保存；

产品说明：
葡萄糖不仅是细胞能量代谢的主要底物，而且其代谢中间产物是生物合成的重要底物。植物可通过光合作用产生葡萄糖。就哺乳动物而言，葡萄糖不仅是大脑神经系统、肌肉、脂肪组织等的唯一能源，而且与还原性辅酶、乳糖和乳脂的合成密切相关。
葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸，并产生过氧化氢；过氧化物酶催化过氧化氢氧化 4- 氨基安替比林偶联酚，生成有色化合物，在 505 nm 有特征吸收峰。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、研钵和蒸馏水。

操作步骤：
一、葡萄糖提取：
组织的处理：按照组织质量（g）：蒸馏水体积(mL)为 1：5~ 10 的比例（建议称取约 0. 1g 组织，加入 1mL 蒸馏水），研磨成匀浆，95℃水浴 10 分钟（盖紧，防止水分散失），冷却后，8000g， 25℃离心 10min ，取上清液备用。
细菌或细胞处理：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104 个）：蒸馏水体积（mL）为 500~ 1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 蒸馏水），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W ，超声 3S ，间隔 10S ，重复 30 次），95℃水浴 10 分钟（盖紧，防止水分散失），冷却后，8000g ，25℃离心 10min ，取上清液备用。

二、测定步骤：
1 、   分光光度计/酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 505nm ，蒸馏水调零。
2 、   混合试剂的配制：使用前将试剂二和试剂三 1:1 等体积混合，用多少配多少。
3 、   加样表（在 EP 管/96 孔板中加入下列试剂）：
试剂(μL）    空白管    标准管    测定管
样本            20
试剂一        20
蒸馏水    20
混合试剂    180    180    180
混匀，置37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴中，保温15min ，于505nm 波长处读取吸光度。空白管、标准管和测定管吸光值分别记为A1 、A2 和A3 。空白管和标准管只要做一管。

三、葡萄糖含量计算：
1 、按样本蛋白浓度计算
葡萄糖含量(μmol/mg prot)=(C 标准×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(V1×Cpr)
=0.5 ×(A3-A1)÷(A2-A1)÷Cpr。
2 、按样本鲜重计算
葡萄糖含量(μmol/g 鲜重）= (C 标准×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2)
=0.5 ×(A3-A1)÷(A2-A1)÷W
3 、按细菌或细胞密度计算
葡萄糖含量(μmol/ 104 cell)= (C 标准×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(500×V1÷V2)
=0.001×(A3-A1)÷(A2-A1)
C 标准：标准管浓度，0.5μmol/mL；V1：加入样本体积，0. 1mL；V2：加入提取液体积，1mL； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g；500：细菌或细胞总数，500万。
注意：最低检测限为50nmol/g 鲜重或0.5nmol/mg prot