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细胞 AMPK 激酶活性比色法定量检测试剂盒产品说明书

发布时间：2025/7/3 11:34:33 阅读次数：7

细胞 AMPK 激酶活性比色法定量检测试剂盒产品说明书

主要用途
细胞 AMPK 激酶活性比色法定量检测试剂是一种旨在通过多肽底物受到 AMPK 磷酸化后，进而由丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶连续循环法反应系统，测定产生 ADP 过程中，伴随的还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）的氧化反应，即采用比色法测定其氧化后峰值的变化，以分析细胞裂解样品中AMPK 活性的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。其适用于各种细胞裂解萃取液样品（动物、人体）、部分或完全纯化酶样品中AMPK 激酶的定量检测，以及抑制剂和激活剂的筛选。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，高度敏感。

技术背景
5’AMP活化蛋白激酶（5’AMP activated protein kinase；AMPK）属于丝氨酸/苏氨酸激酶（serine/threonine      protein kinase）家属成员之一。其为从酵母到人体高度进化保留的激酶复合物，由3个亚体， α 、 β 、 γ构成：其中γ亚体有4个胱硫醚β合酶（cystathione beta synthase；CBS）结构域，又称为巴特曼（Bateman）结构域，以探测AMP和ATP的比例； α亚体含有催化结构域，一旦收到AMPKK或LKB1/MO25/STRAD 复合物催化的磷酸化后，AMPK被激活。所有亚体都有不同异构体形式，包括α 1 、 α2 、 β 1 、 β2 、 γ 1、 γ2 和 γ3。其功能在于保持细胞能量内环境恒定：促进脂肪酸β氧化、抑制胆固醇合成、促进肌肉葡萄糖吸收和调节胰岛素分泌等。AMPK在肝脏、脑和肌肉组织中高度表达。其磷酸化目标序列为 XXXXXXXXXXXX。基于底物XXXXXXXXXXXX，在ATP的存在下，受到5’AMP活化蛋白激酶的磷酸化，获得产物磷酸化多肽，进而通过丙酮酸激酶（pyruvate kinase；PK）和乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase；LDH）反应系统中，还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（reduced nicotinamide adenine dinucleotide；NADH）转化为氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（nicotinamide adenine dinucleotide；NAD），其峰值的变化（340nm），来定量分析5’AMP活化蛋白激酶的活性。其反应方式为：

产品内容
清理液（Reagent A）        毫升
裂解液（Reagent B）        毫升
缓冲液（Reagent C）        毫升
酶促液（Reagent D）    微升
反应液（Reagent E）        微升
底物液（Reagent F）        微升
阴性液（Reagent G）    微升
产品说明书        1 份

保存方式
保存清理液（Reagent A）在 4℃冰箱里；其余的保存在－20℃冰箱里，严格避免光照和反复冻融；有效保证 6 月

用户自备
1.5 毫升离心管：用于样品保存的容器
15 毫升锥形离心管：用于样品处理的容器细胞刮脱棒：用于贴壁细胞脱离
（微型）台式离心机：用于细胞预处理
比色皿或酶标板：用于比色分析操作的容器分光光度仪或酶标仪：用于样品比色分析

实验步骤
一、待测样品准备
1．准备好 25cm2 细胞培养瓶或 60mm细胞培养皿的待测培养细胞（1 至 5 X 106 细胞）
2．小心加入 3 毫升清理液（Reagent A），覆盖生长表面
3．小心抽去清理液
4．使用细胞刮脱棒轻柔刮脱细胞（注意：避免使用胰酶消化）
5．加入 3 毫升清理液（Reagent A），混匀细胞
6．移入到预冷的 15 毫升锥形离心管（注意：悬浮细胞从这一步骤开始）
7．放进 4℃台式离心机离心 5 分钟，速度为 300g
8．小心抽去上清液
9．加入 500 微升裂解液（Reagent B），充分混匀
10．转移到预冷的 1.5 毫升离心管
11．强力涡旋震荡 15 秒
12．置于冰槽里孵育30 分钟
13．放进 4℃微型台式离心机离心 5 分钟，速度为 16000g（或 13000RPM ，例如 eppendorf 5415）
14．小心移取 500 微升上清液到新的预冷的 1.5 毫升离心管
15．移取 10 微升进行蛋白定量检测（注意：建议使用 Bradford 蛋白质浓度定量试剂盒－G&VS30030.1）
16．即刻放进－70℃保存或置于冰槽里继续后续操作

二、测定准备
1 ．准备好待测样品（例如组织裂解悬液等），置于冰槽里
2 ．设定好分光光度仪（温度为 30℃)：波长为 340nm ，间隔 5 分钟，读数 7 次（共 30 分钟），并置零

三、背景对照测定
1．移取 65 微升缓冲液（Reagent C）到新的比色皿
2．加入 10 微升酶促液（Reagent D）
3．加入 5 微升阴性液（Reagent G）
4．放进 30℃培养箱里静置 2 分钟
5．（选择步骤）放进分光光度仪，置零
6．（选择步骤）取出比色皿
7．加入 10 微升反应液（Reagent E）
8．加入 10 微升底物液（Reagent F）
9．上下倾倒数次，混匀（限定在 3 秒之内）
10．即刻放进分光光度仪检测，此为背景空对照：340 波长读数 0 分钟－340 波长读数 30 分钟

四、样品测定
1．移取 65 微升缓冲液（Reagent C）到新的比色皿
2．加入 10 微升酶促液（Reagent D）
3．加入 5 微升待测样品（注意：50 微克组织蛋白；样品须溶解）
4．放进 30℃培养箱里静置 2 分钟
5．（选择步骤）放进分光光度仪，置零
6．（选择步骤）取出比色皿
7．加入 10 微升反应液（Reagent E）
8．加入 10 微升底物液（Reagent F）
9．上下倾倒数次，混匀（限定在 3 秒之内）
10．即刻放进分光光度仪检测，此为样品读数：340 波长读数 0 分钟－340 波长读数 30 分钟

五、计算样品活性

六、酶标板测定
1 ．在 96 孔酶标板上做好相应标记：背景对照和样品
2 ．分别移取 65 微升缓冲液（Reagent C）到 96 孔板中
3 ．分别加入 10 微升酶促液（Reagent D）
4 ．分别加入 5 微升阴性液（Reagent G）或待测样品（50 微克组织蛋白）到相应孔中（注意：样品须清澈）
5 ．轻轻摇动 96 孔酶标板
6 ．在 30℃温度下孵育 2 分钟
7 ．分别加入 10 微升反应液（Reagent E）
8 ．分别加入 10 微升底物液（Reagent F）
9 ．轻轻摇动酶标板
10 ．即刻放进酶标仪检测：0 分钟读数和30 分钟读数
11．活性计算：

注意事项
1 ．本产品为 20 次操作，包括背景操作
2 ．操作时，须戴手套
3 ．系统操作过程中，背景测定只需 1 次
4 ．样品处理忌用磷酸缓冲溶液
5 ．样品须澄清，至关重要
6 ．加入底物液（Reagent F）后 3 秒内即刻比色测定
7 ．测定值由高到低变化；测定可持续 30 分钟
8 ．比色测定后，比色皿须清洗彻底
9 ．样本测定 0 分钟读数高于 30 分钟读数表明具有酶活性
10 ．建议待测样本蛋白浓度为 50 微克/5 微升（本公司提供 Bradford 蛋白质浓度定量试剂盒-G&VS30030. 1）
11．如果待测样品浓度过高或过低，可以调整样品浓度
12 ．可以使用AMPK 抑制剂（DORSOMORPHIN）作为抑制剂对照或阴性对照
13 ．5’AMP 活化蛋白激酶活性单位浓度定义：在 30℃温度下，pH 7.5 条件下，每分钟内能够氧化 1 微摩尔还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）所需的酶量作为一个活性单位
14 ．本公司提供系列蛋白激酶检测试剂产品

质量标准
1 ．本产品经鉴定性能稳定
2 ．本产品经鉴定检测敏感

使用承诺
极威生物秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后 10 天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒
IF IT DOESN’T WORK ， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息
编号        名称                    规格
G&VS50140. 1.3    细胞 AMPK 激酶活性比色法定量检测试剂盒        20 次
G&VS50140. 1.3A    清理液（Reagent A）                500 毫升
G&VS50140. 1.3B    裂解液（Reagent B）                100 毫升
G&VS50140. 1.3C    缓冲液（Reagent C）                50 毫升
G&VS50140. 1.3D    酶促液（Reagent D）            5 毫升
G&VS50140. 1.3E    反应液（Reagent E）                5 毫升
G&VS50140. 1.3F    底物液（Reagent F）                5 毫升
G&VS50140. 1.3G    阴性液（Reagent G）            5 毫升

产品编号        名称                    规格
G&VS50054.1    细胞 Akt1/PKBα激酶活性比色法定量检测试剂盒    20 次
G&VS50054.2    组织 Akt1/PKBα激酶活性比色法定量检测试剂盒    20 次
G&VS50054.3    细胞 Akt2/PKBβ激酶活性比色法定量检测试剂盒    20 次
G&VS50054.4    组织 Akt2/PKBβ激酶活性比色法定量检测试剂盒    20 次
G&VS50054.5    细胞 Akt3/PKBγ激酶活性比色法定量检测试剂盒    20 次
G&VS50054.6    组织 Akt3/PKBγ激酶活性比色法定量检测试剂盒    20 次
G&VS50056.1    细胞 ERK1/2 激酶活性比色法定量检测试剂盒    20 次
G&VS50056.2    组织 ERK1/2 激酶活性比色法定量检测试剂盒    20 次
G&VS50057.1    细胞 P38α激酶活性比色法定量检测试剂盒    20 次
G&VS50057.2    组织 P38α激酶活性比色法定量检测试剂盒    20 次
G&VS50058.1    细胞 PI3K 激酶活性比色法定量检测试剂盒    20 次
G&VS50058.2    组织 PI3K 激酶活性比色法定量检测试剂盒    20 次
G&VS50059.1    细胞 PKA 激酶活性比色法定量检测试剂盒    20 次
G&VS50059.2    组织 PKA 激酶活性比色法定量检测试剂盒    20 次
G&VS50060.1    细胞 Src 激酶活性比色法定量检测试剂盒    20 次
G&VS50060.2    组织 Src 激酶活性比色法定量检测试剂盒    20 次
G&VS50126.1    细胞 PKC 激酶活性比色法定量检测试剂盒    20 次
G&VS50126.2    组织 PKC 激酶活性比色法定量检测试剂盒    20 次
G&VS50140.1    细胞 AMPK 激酶活性比色法定量检测试剂盒    20 次
G&VS50140.2    组织 AMPK 激酶活性比色法定量检测试剂盒    20 次
G&VS50159.1    细胞 ERK1 激酶活性比色法定量检测试剂盒    20 次
G&VS50159.2    组织 ERK1 激酶活性比色法定量检测试剂盒    20 次
G&VS50159.3    细胞 ERK2 激酶活性比色法定量检测试剂盒    20 次
G&VS50159.4    组织 ERK2 激酶活性比色法定量检测试剂盒    20 次
G&VS50161.1    细胞 GSK3α激酶活性比色法定量检测试剂盒    20 次
G&VS50161.2    组织 GSK3α激酶活性比色法定量检测试剂盒    20 次
G&VS50161.3    细胞 GSK3β激酶活性比色法定量检测试剂盒    20 次
G&VS50161.4    组织 GSK3β激酶活性比色法定量检测试剂盒    20 次
G&VS50171.1    细胞 P38β2 激酶活性比色法定量检测试剂盒    20 次
G&VS50171.2    组织 P38β2 激酶活性比色法定量检测试剂盒    20 次
G&VS50178.1    细胞 PKCα激酶活性比色法定量检测试剂盒    20 次
G&VS50178.2    组织 PKCα激酶活性比色法定量检测试剂盒    20 次
G&VS50178.3    细胞PKCβ1 激酶活性比色法定量检测试剂盒    20 次
G&VS50178.4    组织PKCβ1 激酶活性比色法定量检测试剂盒    20 次
G&VS50178.5    细胞 PKCβ2 激酶活性比色法定量检测试剂盒    20 次
G&VS50178.6    组织 PKCβ2 激酶活性比色法定量检测试剂盒    20 次
G&VS50178.7    细胞 PKCγ激酶活性比色法定量检测试剂盒    20 次
G&VS50178.8    组织 PKCγ激酶活性比色法定量检测试剂盒    20 次
G&VS50178.9    细胞 PKCδ激酶活性比色法定量检测试剂盒    20 次
G&VS50178.10    组织 PKCδ激酶活性比色法定量检测试剂盒    20 次
G&VS50178. 11    细胞 PKC ε激酶活性比色法定量检测试剂盒    20 次
G&VS50178. 12    组织 PKC ε激酶活性比色法定量检测试剂盒    20 次
G&VS50178.13    细胞 PKCζ激酶活性比色法定量检测试剂盒    20 次
G&VS50178. 14    组织 PKCζ激酶活性比色法定量检测试剂盒    20 次
G&VS50178.15    细胞 PKCη激酶活性比色法定量检测试剂盒    20 次
G&VS50178.16    组织 PKCη激酶活性比色法定量检测试剂盒    20 次
G&VS50178.17    细胞 PKC θ激酶活性比色法定量检测试剂盒    20 次
G&VS50178.18    组织 PKC θ激酶活性比色法定量检测试剂盒    20 次
G&VS50178.19    细胞 PKC ι激酶活性比色法定量检测试剂盒    20 次
G&VS50178.20    组织 PKC ι激酶活性比色法定量检测试剂盒    20 次