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小鼠（Mouse）二氢睾酮（DHT）检测试剂盒使用说明书

发布时间：2025/7/7 9:50:32 阅读次数：5

本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断
小鼠（Mouse）二氢睾酮（DHT）检测试剂盒使用说明书

检测原理
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被二氢睾酮（DHT）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、 HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB 在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的二氢睾酮（DHT）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

样品收集、处理及保存方法
1.血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心 10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2.血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心 30 分钟取上清。
3.细胞上清液：3000 转离心 10 分钟去除颗粒和聚合物。
4.组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心 10 分钟取上清。
5.保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于 -20℃ ,   避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

自备物品
1.酶标仪（450nm）
2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3.37℃恒温箱

操作注意事项
1.试剂盒保存在 2-8℃ ,    使用前室温平衡 20 分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
3.浓度为 0 的 S0 号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释 5 倍，最终结果乘以 5 才是样本实际浓度。
4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5.所有液体组分使用前充分摇匀。
试剂盒组成

名称        96孔配置        48孔配置        备注
微孔酶标板    12孔×8条        12孔×4条        无
标准品        0.3mL*6管        0.3mL*6管        无
样本稀释液    6mL        3mL        无
检测抗体-HRP    10mL        5mL        无
20×洗涤缓冲液    25mL        15mL        按说明书进行稀释
底物 A        6mL        3mL        无
底物 B        6mL        3mL        无
终止液        6mL        3mL        无
封板膜        2 张        2 张        无
说明书        1 份        1 份        无
自封袋        1 个        1 个        无
注：标准品（ S0-S5）浓度依次为：0 、 15 、30 、60 、 120 、240 pg/mL
试剂的准备
20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按 1：20 稀释，即 1 份的 20×洗涤缓冲液加 19 份的蒸馏水。

洗板方法
1.手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置 1min 后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板 5 次。
2. 自动洗板机：每孔注入洗液 350 μ L，浸泡 1min，洗板 5 次。

操作步骤
1.从室温平衡 20min 后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回 4℃。
2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品 50 μ L； 3.    样本孔先加待测样本 10 μ L，再加样本稀释液 40 μ L；空白孔不加。
4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（ HRP）标记的检测抗体 100 μ L，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育 60min。
5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置 1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板 5 次（也可用洗板机洗板）。
6.每孔加入底物 A 、B 各 50 μ L，37℃避光孵育 15min。
7.每孔加入终止液 50 μ L ，15min 内，在 450nm 波长处测定各孔的 OD 值。

结果判断
绘制标准曲线：在 Excel 工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应 OD 值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。

试剂盒性能
1. 准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数 R 值，大于等于 0.9900。
2. 灵敏度：最低检测浓度小于 1.0 pg/mL。
3. 检测范围：1.0 - 240 pg/mL。
4. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
5. 重复性：板内、板间变异系数均小于 15%。
6. 贮藏：2-8℃ ,   避光防潮保存。
7. 有效期：6 个月

免责声明
1.试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。
2.严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。