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细菌鞭毛蛋白纯化试剂盒说明书

发布时间：2025/7/7 9:54:03 阅读次数：3

CAT#：JW-231119 常温运输和保存
细菌鞭毛蛋白纯化试剂盒

产品及特点
细菌鞭毛蛋白可以作为疫苗佐剂，具有重要的应用价值。传统的纯化细菌鞭毛蛋白的方法多需要使用超速离心或者层析交换，步骤非常繁琐，使用不便，为此本公司开发了不需要超速离心和层析交换的细菌鞭毛蛋白快速纯化试剂盒，它具有下列特点：
1.   只有洗涤和沉淀两步，简单快捷。
2.   所得细菌鞭毛蛋白纯度高，完整性好。
3.   回收效率高，一般能得到相当于总蛋白量 6%的鞭毛蛋白。
4.   可用于 Escherichia coli，Salmone altyphimurium，Salmonela typhi， Citrobacterfreundi等细菌。
5.   本产品需要冷冻高速离心机。
6.   本产品足够 20 次细菌鞭毛蛋白纯化，每次可以处理 1 L 饱和菌液。
7.   本产品只能用于科研。
规格及成分
本产品由一个扁盒和一个大立盒组成，大立盒包装，编号 231119pt1 ，常温运输和保存

成分            编号        规格        包装
10×细菌鞭毛蛋白纯化洗涤液    2311 19a        250 mL        250 mL 本色瓶
使用手册            2311 19sc        1 份        1 份
本产品由一个扁盒和一个大立盒组成，大扁盒包装，编号 231119pt2 ，常温运输和保存

成分            编号        规格        包装
细菌鞭毛蛋白纯化沉淀剂    231119b        250 g×2        500 mL 干粉瓶
使用手册            2311 19sc        1份        1份

运输及保存：常温运输和保存，有效期一年。
自备试剂：超纯水、 PBS 缓冲液（ pH 7.4），透析耗材。

使用方法
1.   实验前取将适量的 10×细菌鞭毛蛋白洗涤液用自备的超纯水稀释 10 倍后得到 1×细
菌鞭毛蛋白洗涤液，放冰上待用。
2.   收集 1 L 过夜培养的细菌饱和培养液（ OD600 在 0.6 左右即可）， 5,000×g 室温离心 10 分钟后弃上清。
3.   在细菌沉淀中加入 200 mL 自备的 PBS 缓冲液（ pH 7.4 ），充分混匀得到细菌重悬液。
4.   5,000×g 室温离心 10 分钟，小心弃除上清。
5.   重复 3-4 步一次。
6.   在细菌沉淀中加入 50 mL 1×细菌鞭毛蛋白洗涤液，充分混匀得到细菌重悬液。
7.   将细菌悬浮液转移到 100 mL 烧杯中（或 100 mL 平底塑料平中）并放入磁力搅拌子，再将 100 mL 烧杯放到一个大烧杯（如 2 L 烧杯）中间，周边入碎冰固定小烧杯，然后将装有小烧杯的大烧杯放在磁力搅拌器上搅拌 30 分钟。
8.   取出搅拌子，将细菌重悬液转移到离心管中， 10,000×g 离心 20 分钟，小心收集含
有细菌鞭毛蛋白的上清液。
9.   将上清液转移到一个 100 mL 干净烧杯中并放入磁力搅拌子，再将 100 mL 烧杯放到一个大烧杯（如 2 L 烧杯）中间，周边入碎冰固定小烧杯，然后将装有小烧杯的大烧杯放在磁力搅拌器上缓慢搅拌。搅拌中加入细菌鞭毛蛋白纯化沉淀剂 23.6 g ，待沉淀剂溶解后停止搅拌，静置 45 分钟。期间细菌鞭毛蛋白将形成沉淀。
10. 取出搅拌子，将溶液转移到干净离心管中， 4 ℃下 10,000×g 离心 10 分钟。
11. 小心弃除上清，所得沉淀为细菌鞭毛蛋白。
12. 由于所得细菌鞭毛蛋白含盐，所以用户需要采用过柱除盐法或透析除盐法除盐。由于细菌鞭毛蛋白分子量在 15-40 Kd ，所以需要据此选择合适截留孔径的透析袋，在合适透析液（根据后续实验确定）中进行过夜透析。本试剂盒不含相关试剂。
关联产品：His-标记蛋白微量纯化试剂盒