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发布时间：2025/7/10 11:12:56 阅读次数：2
胞浆内钙离子浓度荧光（Fura-2）检测试剂盒产品说明书
主要用途
胞浆内钙离子浓度荧光（Fura-2）检测试剂是一种旨在通过胞浆钙离子特异性荧光探针Fura-2-AM，与钙离子结合后，其荧光强度显著增强，在荧光酶标仪下测量不同激发波长下相对荧光峰值的比值，来测定细胞浆总钙离子浓度的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种活体细胞（动物、人体等）或冰冻切片组织细胞浆钙离子的浓度检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，检测敏感。
技术背景
钙是人体中的一种重要电介质和矿物质，占1150克。其中99％的钙以氟磷灰石钙（calcium fluorophosphate apatite）形式存在于骨组织中。非骨组织钙成分主要存在于细胞内。钙具有两种主要形式：一种是非弥散型蛋白结合钙，其构成约40％至50％的血清中的总钙含量；另一种为弥散型游离钙，其进一步分成具有活性的复合钙（complexed calcium）和离子钙（ionized calcium）。钙对神经肌肉兴奋性（neuromuscular excitability）、血液凝固、酶的激活、离子跨膜运输、释放神经传导介质、信使传导等方面起着重要作用。在细胞内，钙离子主要储存在线粒体和内质网等细胞器中。其中细胞浆钙离子在调节钙离子通道，维持细胞内环境钙离子平衡方面起着重要作用。细胞浆钙的检测包括沉淀法、EDTA鳌合滴定法、火焰光度法（flame photometry）、原子吸收分光光度法等技术，但容易受到钠、钾、磷酸盐、硫酸盐的干扰，或者受限于仪器的特殊的要求，以及需要细胞浆分离。Fura-2 AM（acetoxy-methyl ester），一种具有细胞膜通透性，与钙离子结合产生荧光的染料，通过其不同激发波长340nm/380nm产生的荧光信号比（散发波长510nm）来精确测定细胞浆内钙离子水平。
产品内容
清理液（Reagent A） 40毫升
染色液（Reagent B） 30微升
介导液（Reagent C） 600微升
饱和液（Reagent D） 2毫升
阴性液（Reagent E） 2毫升
裂解液（Reagent F） 200微升
产品说明书 1份
保存方式
保存染色液（Reagent B）和介导液（Reagent C）在－20℃冰箱里，避免光照；其余的保存在4℃冰箱里；有效保证6月
用户自备
1.5毫升离心管：用于工作液配制的容器
细胞培养箱：用于染色孵育
黑色96孔板：用于样品操作的容器
荧光酶标仪：用于荧光分析
（共聚焦）荧光显微镜：用于荧光染色观察
实验步骤
一、测定准备
1．设定好荧光酶标仪：激发波长340nm和380nm，散发波长510nm；增益倍数100至200
2．测定开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的染色液（Reagent B）室温下融化，然后分别移出30微升介导液（Reagent C）和1.5微升染色液（Reagent B）到新的1.5毫升离心管，标记为染色工作液，并放在暗室里备用。然后进行下列操作。
二、荧光酶标仪检测
1．准备1个黑色96孔板，标记为：细胞样品孔、空白对照孔（不含细胞）、最大对照孔（含细胞）
2．小心抽去细胞样品孔和最大对照孔的培养液
3．加入100微升清理液（Reagent A）到细胞样品孔里
4．加入100微升饱和液（Reagent D）到最大对照孔里
5．加入100微升阴性液（Reagent E）到空白对照孔里
6．分别加入10微升染色工作液到所有孔里
7．轻轻摇动黑色96孔板，混匀
8．放进37℃细胞培养箱里孵育60分钟，避免光照
9．小心抽去细胞样品孔里的上清液
10．小心加入100微升清理液（Reagent A）到细胞样品孔里
11．重复实验步骤9和10一次
12．放进37℃细胞培养箱里孵育30分钟
13．加入5微升裂解液（Reagent F）到最大对照孔里
14．放进37℃细胞培养箱里孵育15分钟
15．即刻放进荧光酶标仪测读：获得相对荧光单位（relative fluorescence unit；RFU）包括样品RFU340nm、样品RFU380nm、空白对照孔RFU340nm、空白对照孔RFU380nm、最大对照孔RFU340nm、最大对照孔RFU380nm
16．计算样品细胞浆钙离子浓度
{【（样品RFU340nm/样品RFU380nm）－（空白对照孔RFU340nm/空白对照孔RFU380nm）】÷【（最大对照孔RFU340nm/最大对照孔RFU380nm－样品RFU340nm/样品RFU380nm）】}X（空白对照孔RFU380nm/最大对照孔RFU380nm） X 140（纳摩尔/升；解离常数）
三、（共聚焦）或荧光显微镜检测
1． 准备1个待测的细胞爬片样品
2．小心加上500微升清理液（Reagent A），覆盖样品表面
3．小心移去样品上的清理液（Reagent A）
4．移取300微升清理液（Reagent A）到新的1.5毫升离心管
5．加入30微升染色工作液，混匀
6．小心加上上述含有染色工作液的溶液到样品上，覆盖样品表面
7．放进37℃细胞培养箱里孵育60分钟，避免光照
8．小心移去样品上的染色工作液
9．小心加上500微升新鲜的清理液（Reagent A）
10．小心移去清理液（Reagent A）
11．小心加上500微升新鲜的清理液（Reagent A）
12．放进37℃细胞培养箱里孵育30分钟
13．小心移去清理液（Reagent A）
14．盖上盖玻片
15．即刻在（共聚焦）荧光显微镜下进行观察：激发波长340至400nm，散发波长510nm（细胞浆钙离子呈现蓝色或绿色荧光）（注意：见注意事项9）
四、冰冻切片检测
1．准备1个待测的冰冻切片
2．小心加上500微升清理液（Reagent A），覆盖切片样品表面
3．小心移去样品上的清理液（Reagent A）
4．移取300微升清理液（Reagent A）到新的1.5毫升离心管
5．加入30微升染色工作液，混匀
6．小心加上上述含有染色工作液的溶液到切片样品上，覆盖样品表面
7．放进37℃细胞培养箱里孵育60分钟，避免光照
8．小心移去切片上的染色工作液
9．小心加上500微升新鲜的清理液（Reagent A）
10．小心移去清理液（Reagent A）
11．小心加上500微升新鲜的清理液（Reagent A）
12．放进37℃细胞培养箱里孵育30分钟
13．小心移去清理液（Reagent A）
14．盖上盖玻片
15．即刻在（共聚焦）荧光显微镜下进行观察：激发波长340至400nm，散发波长510nm（组织细胞浆钙离子呈现蓝色或绿色荧光）（注意：见注意事项9）
注意事项
1．本产品为20次（显微镜）或60次（96孔板）操作
2．操作时，须戴手套
3．可以使用荧光分光光度仪检测
4．如果细胞内酯酶缺失，则建议使用微注射（microinjection）技术
5．避免使用EDTA等处理样品
6．孵育反应完成后即刻进行荧光测定
7．如果待测样品浓度过高或过低，可以调整样品浓度
8．检测敏感度可达纳摩尔级钙浓度范围
9．荧光显微镜检测注意事项：
1）建议使用激发和散发波长滤波器MS-455LD和OI-19-EM，可以精准在340nm和380nm激发，510nm散发，获得蓝色荧光和绿色荧光等
2）基础荧光为深蓝色荧光，如果胞浆内钙离子浓度高，显示绿色荧光增强，参考图像如下：（上图为基础钙离子荧光；中图为钙离子增强绿色荧光；下图为高浓度钙离子绿色荧光）
3）可以使用专用软件分析出图像中的钙离子浓度
4）如果没有特定滤波器和软件，使用蓝光和绿光进行定性初步观察，注意绿色荧光的差异
10．可以使用通用UV2A或2B模块，避免使用2E/C模块
11．本产品不适宜于细胞流式仪检测
12．本公司提供系列钙生化检测试剂产品
质量标准
1．本产品经鉴定性能稳定
2．本产品经鉴定检测敏感
使用承诺
上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。
友情提醒
IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。
订购信息
单组分订购信息
编号 名称 规格
G&VS10152.1 胞浆内钙离子浓度荧光（Fura-2）检测试剂盒 20次
G&VS10152.1A 清理液（Reagent A） 40毫升
G&VS10152.1B 染色液（Reagent B） 30微升
G&VS10152.1C 介导液（Reagent C） 600微升
G&VS10152.1D 饱和液（Reagent D） 2毫升
G&VS10152.1E 阴性液（Reagent E） 2毫升
G&VS10152.1F 裂解液（Reagent F） 1毫升
试剂盒订购信息
产品编号 名称 规格
G&VS50097.1 细胞钙离子浓度比色法定量检测试剂盒 20次
G&VS50097.2 组织钙离子浓度比色法定量检测试剂盒 20次
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G&VS50097.5 环境钙离子浓度比色法定量检测试剂盒 20次
G&VS70036 血清钙比色法定量检测试剂盒 50次
G&VS10152.1 胞浆内钙离子浓度荧光（Fura-2）检测试剂盒 20次
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G&VS80046.1 石蜡样品茜素红（ALIZARIN RED S）钙染色试剂盒 50次
G&VS80046.2 冰冻样品茜素红（ALIZARIN RED S）钙染色试剂盒 50次
G&VS80046.3 细胞茜素红（ALIZARIN RED S）钙染色试剂盒 50次
G&VS80046.4 全组织茜素红（ALIZARIN RED S）钙染色试剂盒 10次
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