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平末端克隆试剂盒说明书

发布时间：2025/7/11 10:46:34 阅读次数：1

CAT#:JW -230710
低温运输，-20℃保存

平末端克隆试剂盒

产品及特点
用Pfu DNA聚合酶等高保真DNA聚合酶扩增得到的PCR产物为平末端，直接克隆比较困难。本试剂盒提供了含克隆载体的平末端DNA片段克隆试剂，极大提高了其克隆效率。本产品具有下列特点：
1.基于T4 DNA连接酶的平末端克隆。
2.优化的连接体系，极大降低载体自连。
3.使用蓝白斑筛选，一般95%以上的白转化子都是带有DNA插入片段的重组子。
4.可用于克隆高保真DNA聚合酶如Pfu、Pwo、DeepVent等DNA聚合酶扩增得到的PCR产物；也可以用于克隆一些产生平末端的限制性内切酶如EcoRV和SmaI等酶酶切产生的DNA片段；还可用于克隆由粘端DNA用DNA聚合酶补平后的得到的平末端DNA片段。
5.本产品足够20次的10mL体系的平末端克隆。
6.本产品只可用于科研。

规格及成分
成份            编号        规格    包装
超纯水            210806        1 mL    1.5 mL蓝盖管
平末端克隆B载体        230710a        20次    0.5 mL黄盖管
10×平末端克隆缓冲液        230710b        20 mL    0.5 mL绿盖管
T4 DNA连接酶，5U/ mL    220758        20 mL    0.5 mL红盖管
使用手册            230710sc        1份    无
本产品采用五孔盒包装

运输及保存
低温运输，-20℃保存，有效期一年。

自备试剂
平末端DNA片段、大肠杆菌感受态细胞

使用方法
1.按下表设置连接反应体系。注意：首次使用本产品时需要在平末端克隆B载体干粉管中加入22 mL的超纯水，涡旋震荡30秒溶解，短暂离心后即可使用。没有用完的平末端克隆B载体溶液需要放-20℃保存：
成份            用量
纯化后的平末端DNA片段    10 ng
10×平末端克隆缓冲液        1uL
平末端克隆B载体溶液        1uL
T4 DNA连接酶，5U/ mL    1uL
补超纯水到        10uL
2.37℃保温，60分钟。
3.连接产物可直接用于后续转化自备的大肠杆菌感受态细胞，37℃过夜培养。注意：本产品使用的B载体是Amp抗性，故需要涂盘在含Amp的LB培养基上筛选重组子，同时还需要在LB培养基中加入终浓度是40 mg/m的LX-gal和终浓度是24 mg/mL的IPTG，这样可以通过蓝白斑筛选来降低假阳性率到5%以下。白斑是重组子，蓝斑是非重组子。

载体图谱
B载体由Sma I酶切G载体后经过纯化而得，G载体图谱如下：

载体序列
B载体是Sma I酶切G载体而得,酶切位点见下列序列中标黄部分
11 ACGTTATCGA CTGCACGGTG CACCAATGCT TCTGGCGTCA GGCAGCCATC 50
151 GGAAGCTGTG GTATGGCTGT GCAGGTCGTA AATCACTGCA TAATTCGTGT 100
101 CGCTCAAGGC GCACTCCCGT TCTGGATAAT GTTTTTTGCG CCGACATCAT 150
151 AACGGTTCTG GCAAATATTC TGAAATGAGC TGTTGACAAT TAATCATCGG 200
201 CTCGTATAAT GTGTGGAATT GTGAGCGGAT AACAATTTCA CACAGGAAAC 250
251 AGTATTCATG TCCCCTATAC TAGGTTATTG GAAAATTAAG GGCCTTGTGC 300
301 AACCCACTCG ACTTCTTTTG GAATATCTTG AAGAAAAATA TGAAGAGCAT 350
351 TTGTATGAGC GCGATGAAGG TGATAAATGG CGAAACAAAA AGTTTGAATT 400
401 GGGTTTGGAG TTTCCCAATC TTCCTTATTA TATTGATGGT GATGTTAAAT 450
451 TAACACAGTC TATGGCCATC ATACGTTATA TAGCTGACAA GCACAACATG 500
501 TTGGGTGGTT GTCCAAAAGA GCGTGCAGAG ATTTCAATGC TTGAAGGAGC 550
551 GGTTTTGGAT ATTAGATACG GTGTTTCGAG AATTGCATAT AGTAAAGACT 600
601 TTGAAACTCT CAAAGTTGAT TTTCTTAGCA AGCTACCTGA AATGCTGAAA 650
651 ATGTTCGAAG ATCGTTTATG TCATAAAACA TATTTCGCGC AATTAACCCT 700
701 CACTAAAGGG AACAAAAGCT GGAGCTCCAC CGCGGTGGCG GCCGCTCTAG 750
751 AACTAGTGGA TCCCCCGGGC TGCAGGAATT CGATATCAAG CTTATCGATA 800
801 CCGTCGACCT CGAGGGGGGG CCCGGTACCC AATTCGCCCT ATAGTGAGTC 850
851 GTATTACGCG CGAAATGGTG ATCATGTAAC CCATCCTGAC TTCATGTTGT 900
901 ATGACGCTCT TGATGTTGTT TTATACATGG ACCCAATGTG CCTGGATGCG 950
951 TTCCCAAAAT TAGTTTGTTT TAAAAAACGT ATTGAAGCTA TCCCACAAAT 1000
1001 TGATAAGTAC TTGAAATCCA GCAAGTATAT AGCATGGCCT TTGCAGGGCT 1050
1051 GGCAAGCCAC GTTTGGTGGT GGCGACCATC CTCCAAAATC GGATCTGGTT 1100
1101 CCGCGTGGAT CCAAACGGGC AGGCACCCAA TGCACTAACT GTCAAACGAC 1150
1151 CACTACAACA CTCTGGCGGA GGAATGCCAG CGGAGATCCG GTATGCAATG 1200
1201 CCTGCGGCCT CTATTTCAAG CTCCATCAGG TGAACCGCCC ACTGACCATG 1250
1251 AGGAAAGATG GAATCCAGAC GAGGAACCGC AAGGCATCTG GCAAAGGGAA 1300
1301 AAAGAAGCGG GGGTCGAATG GAATTCATCG TGACTGACTG ACGATCTGCC 1350
1351 TCGCGCGTTT CGGTGATGAC GGTGAAAACC TCTGACACAT GCAGCTCCCG 1400
1401 GAGACGGTCA CAGCTTGTCT GTAAGCGGAT GCCGGGAGCA GACAAGCCCG 1450
1451 TCAGGGCGCG TCAGCGGGTG TTGGCGGGTG TCGGGGCGCA GCCATGACCC 1500
1501 AGTCACGTAG CGATAGCGGA GTGTATAATT CTTGAAGACG AAAGGGCCTC 1550
1551 GTGATACGCC TATTTTTATA GGTTAATGTC ATGATAATAA TGGTTTCTTA 1600
1601 GACGTCAGGT GGCACTTTTC GGGGAAATGT GCGCGGAACC CCTATTTGTT 1650
1651 TATTTTTCTA AATACATTCA AATATGTATC CGCTCATGAG ACAATAACCC 1700
1701 TGATAAATGC TTCAATAATA TTGAAAAAGG AAGAGTATGA GTATTCAACA 1750
1751 TTTCCGTGTC GCCCTTATTC CCTTTTTTGC GGCATTTTGC CTTCCTGTTT 1800
1801 TTGCTCACCC AGAAACGCTG GTGAAAGTAA AAGATGCTGA AGATCAGTTG 1850
1851 GGTGCACGAG TGGGTTACAT CGAACTGGAT CTCAACAGCG GTAAGATCCT 1900
1901 TGAGAGTTTT CGCCCCGAAG AACGTTTTCC AATGATGAGC ACTTTTAAAG 1950
1951 TTCTGCTATG TGGCGCGGTA TTATCCCGTG TTGACGCCGG GCAAGAGCAA 2000
2001 CTCGGTCGCC GCATACACTA TTCTCAGAAT GACTTGGTTG AGTACTCACC 2050
2051 AGTCACAGAA AAGCATCTTA CGGATGGCAT GACAGTAAGA GAATTATGCA 2100
2101 GTGCTGCCAT AACCATGAGT GATAACACTG CGGCCAACTT ACTTCTGACA 2150
2151 ACGATCGGAG GACCGAAGGA GCTAACCGCT TTTTTGCACA ACATGGGGGA 2200
2201 TCATGTAACT CGCCTTGATC GTTGGGAACC GGAGCTGAAT GAAGCCATAC 2250
2251 CAAACGACGA GCGTGACACC ACGATGCCTG CAGCAATGGC AACAACGTTG 2300
2301 CGCAAACTAT TAACTGGCGA ACTACTTACT CTAGCTTCCC GGCAACAATT 2350
2351 AATAGACTGG ATGGAGGCGG ATAAAGTTGC AGGACCACTT CTGCGCTCGG 2400
2401 CCCTTCCGGC TGGCTGGTTT ATTGCTGATA AATCTGGAGC CGGTGAGCGT 2450
2451 GGGTCTCGCG GTATCATTGC AGCACTGGGG CCAGATGGTA AGCCCTCCCG 2500
2501 TATCGTAGTT ATCTACACGA CGGGGAGTCA GGCAACTATG GATGAACGAA 2550
2551 ATAGACAGAT CGCTGAGATA GGTGCCTCAC TGATTAAGCA TTGGTAACTG 2600
2601 TCAGACCAAG TTTACTCATA TATACTTTAG ATTGATTTAA AACTTCATTT 2650
2651 TTAATTTAAA AGGATCTAGG TGAAGATCCT TTTTGATAAT CTCATGACCA 2700
2701 AAATCCCTTA ACGTGAGTTT TCGTTCCACT GAGCGTCAGA CCCCGTAGAA 2750
2751 AAGATCAAAG GATCTTCTTG AGATCCTTTT TTTCTGCGCG TAATCTGCTG 2800
2801 CTTGCAAACA AAAAAACCAC CGCTACCAGC GGTGGTTTGT TTGCCGGATC 2850
2851 AAGAGCTACC AACTCTTTTT CCGAAGGTAA CTGGCTTCAG CAGAGCGCAG 2900
2901 ATACCAAATA CTGTCCTTCT AGTGTAGCCG TAGTTAGGCC ACCACTTCAA 2950
2951 GAACTCTGTA GCACCGCCTA CATACCTCGC TCTGCTAATC CTGTTACCAG 3000
3001 TGGCTGCTGC CAGTGGCGAT AAGTCGTGTC TTACCGGGTT GGACTCAAGA 3050
3051 CGATAGTTAC CGGATAAGGC GCAGCGGTCG GGCTGAACGG GGGGTTCGTG 3100
3101 CACACAGCCC AGCTTGGAGC GAACGACCTA CACCGAACTG AGATACCTAC 3150
3151 AGCGTGAGCT ATGAGAAAGC GCCACGCTTC CCGAAGGGAG AAAGGCGGAC 3200
3201 AGGTATCCGG TAAGCGGCAG GGTCGGAACA GGAGAGCGCA CGAGGGAGCT 3250
3251 TCCAGGGGGA AACGCCTGGT ATCTTTATAG TCCTGTCGGG TTTCGCCACC 3300
3301 TCTGACTTGA GCGTCGATTT TTGTGATGCT CGTCAGGGGG GCGGAGCCTA 3350
3351 TGGAAAAACG CCAGCAACGC GGCCTTTTTA CGGTTCCTGG CCTTTTGCTG 3400
3401 GCCTTTTGCT CACATGTTCT TTCCTGCGTT ATCCCCTGAT TCTGTGGATA 3450
3451 ACCGTATTAC CGCCTTTGAG TGAGCTGATA CCGCTCGCCG CAGCCGAACG 3500
3501 ACCGAGCGCA GCGAGTCAGT GAGCGAGGAA GCGGAAGAGC GCCTGATGCG 3550
3551 GTATTTTCTC CTTACGCATC TGTGCGGTAT TTCACACCGC ATAAATTCCG 3600
3601 ACACCATCGA ATGGTGCAAA ACCTTTCGCG GTATGGCATG ATAGCGCCCG 3650
3651 GAAGAGAGTC AATTCAGGGT GGTGAATGTG AAACCAGTAA CGTTATACGA 3700
3701 TGTCGCAGAG TATGCCGGTG TCTCTTATCA GACCGTTTCC CGCGTGGTGA 3750
3751 ACCAGGCCAG CCACGTTTCT GCGAAAACGC GGGAAAAAGT GGAAGCGGCG 3800
3801 ATGGCGGAGC TGAATTACAT TCCCAACCGC GTGGCACAAC AACTGGCGGG 3850
3851 CAAACAGTCG TTGCTGATTG GCGTTGCCAC CTCCAGTCTG GCCCTGCACG 3900
3901 CGCCGTCGCA AATTGTCGCG GCGATTAAAT CTCGCGCCGA TCAACTGGGT 3950
3951 GCCAGCGTGG TGGTGTCGAT GGTAGAACGA AGCGGCGTCG AAGCCTGTAA 4000
4001 AGCGGCGGTG CACAATCTTC TCGCGCAACG CGTCAGTGGG CTGATCATTA 4050
4051 ACTATCCGCT GGATGACCAG GATGCCATTG CTGTGGAAGC TGCCTGCACT 4100
4101 AATGTTCCGG CGTTATTTCT TGATGTCTCT GACCAGACAC CCATCAACAG 4150
4151 TATTATTTTC TCCCATGAAG ACGGTACGCG ACTGGGCGTG GAGCATCTGG 4200
4201 TCGCATTGGG TCACCAGCAA ATCGCGCTGT TAGCGGGCCC ATTAAGTTCT 4250
4251 GTCTCGGCGC GTCTGCGTCT GGCTGGCTGG CATAAATATC TCACTCGCAA 4300
4301 TCAAATTCAG CCGATAGCGG AACGGGAAGG CGACTGGAGT GCCATGTCCG 4350
4351 GTTTTCAACA AACCATGCAA ATGCTGAATG AGGGCATCGT TCCCACTGCG 4400
4401 ATGCTGGTTG CCAACGATCA GATGGCGCTG GGCGCAATGC GCGCCATTAC 4450
4451 CGAGTCCGGG CTGCGCGTTG GTGCGGATAT CTCGGTAGTG GGATACGACG 4500
4501 ATACCGAAGA CAGCTCATGT TATATCCCGC CGTTAACCAC CATCAAACAG 4550
4551 GATTTTCGCC TGCTGGGGCA AACCAGCGTG GACCGCTTGC TGCAACTCTC 4600
4601 TCAGGGCCAG GCGGTGAAGG GCAATCAGCT GTTGCCCGTC TCACTGGTGA 4650
4651 AAAGAAAAAC CACCCTGGCG CCCAATACGC AAACCGCCTC TCCCCGCGCG 4700
4701 TTGGCCGATT CATTAATGCA GCTGGCACGA CAGGTTTCCC GACTGGAAAG 4750
4751 CGGGCAGTGA GCGCAACGCA ATTAATGTGA GTTAGCTCAC TCATTAGGCA 4800
4801 CCCCAGGCTT TACACTTTAT GCTTCCGGCT CGTATGTTGT GTGGAATTGT 4850
4851 GAGCGGATAA CAATTTCACA CAGGAAACAG CTATGACCAT GATTACGGAT 4900
4901 TCACTGGCCG TCGTTTTACA ACGTCGTGAC TGGGAAAACC CTGGCGTTAC 4950
4951 CCAACTTAAT CGCCTTGCAG CACATCCCCC TTTCGCCAGC TGGCGTAATA 5000
5001 GCGAAGAGGC CCGCACCGAT CGCCCTTCCC AACAGTTGCG CAGCCTGAAT 5050
5051 GGCGAATGGC GCTTTGCCTG GTTTCCGGCA CCAGAAGCGG TGCCGGAAAG 5100
5101 CTGGCTGGAG TGCGATCTTC CTGAGGCCGA TACTGTCGTC GTCCCCTCAA 5150
5151 ACTGGCAGAT GCACGGTTAC GATGCGCCCA TCTACACCAA CGTAACCTAT 5200
5201 CCCATTACGG TCAATCCGCC GTTTGTTCCC ACGGAGAATC CGACGGGTTG 5250
5251 TTACTCGCTC ACATTTAATG TTGATGAAAG CTGGCTACAG GAAGGCCAGA 5300
5301 CGCGAATTAT TTTTGATGGC GTTGGAATTA 5330 CCATA ATCAAACA   5350
关联产品:TA克隆试剂盒