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真菌 RNA 纯化试剂盒（过柱法）

发布时间：2025/7/11 10:55:16 阅读次数：1

CAT#:JW-980804
常温运输及保存

真菌 RNA 纯化试剂盒（过柱法）

产品及特点
本产品专门用于真菌 RNA 的纯化，它具有下列特点：
1.   柱式操作，更加简单快捷，整个过程只需要约 30 分钟。
2.   RNA 纯度高，OD260/280一般都在 2.0 左右，可直接用于 RT-PCR、 Northern 杂交、 microarray hybridization、 cDNA 合成等实验。
3.   RNA 产量高，一般在 20-70 μg/mL 酵母培养物(约 2E7 个细胞)。
4.   非酶细胞破裂法，适用于各种形态和各个种属的真菌，包括 Candida albican、
Saccharomyces cerevisiae、Schizosaccharomycespombe、Pichia pastoris 等。
5.   本产品足够 50 次微量纯化实验。
6.   本产品只能用于科研。
规格及成分
本产品采用大扁盒包装
成份            编号        规格    包装材料
真菌 RNA 纯化溶液 A        980804a        20 mL    30 mL 本色瓶
真菌 RNA 纯化溶液 B        980804b        25 mL    30mL 棕色玻璃瓶
真菌 RNA 纯化溶液 C        980804c        75 mL    125 mL 本色瓶
真菌 RNA 纯化溶液 D        980804d        25 mL    30 mL 本色瓶
离心吸附柱        220144        50 套    塑料袋
通用洗柱液        220143        50 mL    60 mL 本色瓶
RNA 洗脱液        971207        10 mL    10 mL 本色瓶
使用手册            980804sc        1 份    1 份

运输及保存：常温运输和保存，有效期一年。
自备试剂：氯仿

使用方法
1. 将 50 mg 左右的干菌丝(或 100 mg 左右的鲜菌丝、适当数量的真菌菌落)转移到 1.5 mL 塑料离心管中。如果是液体真菌培养物，则直接将 1-10 mL 液体真菌在 1.5 mL 塑料离心管中 12,000-15,000×g 离心 1 分钟，并弃尽液体培养基（可以分多次离心）。
2. 加入 0.4 mL 真菌 RNA 纯化溶液 A 并充分吹打混匀。如果真菌 RNA 纯化溶液 A 存放时产生沉淀，请置于 65℃融化，用前充分摇晃均匀。
3. 加入 0.4 mL 溶液 B ，剧烈振荡 30 秒。
4. 65℃保温 5 分钟。
5. 室温 12,000-15,000×g 离心 3-5 分钟，转移上清到一干净的 1.5 mL 塑料离心管中。
6. 再加入 0.1 mL 真菌 RNA 纯化溶液 B 和 0.1 mL 自备氯仿，振荡混匀 30 秒。
7. 室温 12,000-15,000×g 离心 3-5 分钟，转移上清到一自备的、干净的 5 mL 塑料离心管中。
8. 加入相当于上清 3 倍体积的真菌 RNA 纯化溶液 C（约 1.2-1.5 mL）和 1 倍体积的溶液 D（约 0.4-0.5 mL），充分混匀。
9. 将混合液（约 2.5 mL）分 3-4 次转移到离心吸附柱中。每次 13,000-15,000×g 室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。
10. 用 0.5 mL 通用洗柱液到离心吸附柱中，室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。
11. 一次洗涤一般足够去除杂质。但如果样品 OD260/280 比值不高，可以再用 0.5 mL 通用洗柱液重复此步一次。
12. 室温离心半分钟。此步十分重要，否则残留的洗柱液会影响 RNA 的使用。
13. 将离心吸附柱转移到一自备的 RNase-free 1.5 mL 塑料离心管中，加入 30-100 μL RNA 洗脱液。
14. 室温离心半分钟，离心管中溶液即为 RNA 样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
15. RNA 完整性的电泳检测：如果需要做 Northern 杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行 RNA 电泳。
16. RNA 产量产率测定：将 5-10 μL RNA 溶于 TE 缓冲液中(pH 7.5-8.2 之间)检测其在 OD260 的光吸收。通过光吸收可以得出 RNA 浓度（1 OD260 的 RNA=40 μg/mL），进而计算出 RNA 的产量（浓度×体积)和产率(RNA 产量/真菌用量)。注意不要将 RNA 稀释在 DEPC 水中检测 OD260和 OD280，否则光吸收比在 TE 中测得的低 10%-15%。
17. RNA 纯度测定：无污染的总 RNA 的 OD260/OD280一般在 1.8-2.1 之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，OD260/OD230一般在 2.0-2.3 之间，如果低于或高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质或多糖的污染，但一般不影响 RT-PCR 等反应。蛋白质污染可以通过酚/氯仿抽提一次然后酒精沉淀去除，DNA 和多糖污染可以分别用多糖清除剂去除。测 OD 时 RNA 不能过度稀释使 OD 读数低于仪器的有效范围，如果低于一起的检测范围，该读数无效。
关联产品：真菌 DNA 纯化试剂盒