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组织透明质酸酶（hyaluronidase）活性Mogan-Elson比色法定量检测试剂盒产品说明书

发布时间：2025/7/11 12:10:35 阅读次数：1

组织透明质酸酶（hyaluronidase）活性Mogan-Elson比色法定量检测试剂盒产品说明书

主要用途
组织透明质酸酶（hyaluronidase）活性Mogan-Elson比色法定量检测试剂是一种旨在通过透明质酸酶反应系统中透明质酸水解后的产物还原性N-乙酰葡糖胺和对二甲氨基苯甲醛作用后吸光峰值的变化，即采用比色法来测定样品中酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心改良Mogan-Elson方法、成功实验证明的。其适用于各种组织裂解萃取液样品（动物、人体）透明质酸酶的活性检测和抑制剂筛选。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。

技术背景
透明质酸酶（hyaluronidase；EC3.2.1.35），又称为透明质酸4-聚糖水解酶（Hyaluronate 4-glycanohydrolase），是一组降解透明质酸的糖苷水解酶家族，为同源二聚体。其催化水解透明质酸烷（hyzluronan）多体，切离β1,4键，产生N-乙酰葡糖胺（N-acetyl-D-glucosamine；GlcNAc）和葡糖醛酸（D-glucuronic acid；GlcA）。透明质酸或透明质酸烷是一种多聚糖，广泛分布在体内细胞外基质，具有结构和生物功能，包括组织的生长、发育和修复作用。透明质酸酶在各种生物体内，包括细菌和哺乳动物等表达。人体有5种同工酶。透明质酸酶在组织结构、细胞繁殖、分化、生长、迁徙、转移、血管生成、卵细胞受精、细胞粘附等方面具有重要作用。其降低透明质酸烷粘稠度，增强组织通透性。其活性增强，与乳腺癌、肺癌、前列腺癌、卵巢癌、直肠癌、肾母细胞瘤、关节病等相关。一旦缺失，将导致细胞外基质失调，引起粘多糖储积症（mucopolysaccharidosis IX）。透明质酸酶成为抗衰老、抗过敏、抗炎症、抗肿瘤的药物靶标。基于底物透明质酸，在透明质酸酶的催化下，产生N-乙酰葡糖胺和葡糖醛酸，进而与对二甲氨基苯甲醛（p-dimethylaminobenzaldehyde；DMAB）作用，产生粉红色产物，呈现吸光峰值（585nm波长）的变化，据此定量测定透明质酸酶的活性。其反应系统为：

产品内容
缓冲液（Reagent A）     毫升
反应液（Reagent B）     毫升
底色液（Reagent C）        毫升
终止液（Reagent D）    微升
显色液（Reagent E）        毫升
标准液（Reagent F）        微升
清理液（Reagent G）    毫升
裂解液（Reagent H）    毫升
产品说明书        1份

保存方式
保存反应液（Reagent B）、底色液（Reagent C）、显色液（Reagent E）和标准液（Reagent F）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里；显色液（Reagent E）避免光照；终止液（Reagent D）和显色液（Reagent E）具有腐蚀性，注意安全；有效保证6月

用户自备
1.5毫升离心管：用于样品操作的容器
15毫升锥形离心管：用于样品操作的容器
DOUNCE匀浆器：用于裂解组织
恒温水槽：用于孵育反应
微型台式离心机：用于样品操作
500微升1厘米光径比色皿：用于比色的容器
分光光度仪：用于比色分析

实验步骤
实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的反应液（Reagent B）和底色液（Reagent C）置入冰槽里融化；缓冲液（Reagent A）室温下预热。然后进行下列操作。
一、    样品准备
1．手术取出动物组织，并秤重以确定100至500毫克组织重量
2．（选择步骤）放进预冷的15毫升锥形离心管
3．（选择步骤）加入xx毫升清理液（Reagent G）清洗1次
4．移入到一个液氮冻存管
5．即刻放进液氮罐过夜
6．次日从液氮罐里取出，即刻（最快速度）用研磨棒碾碎组织成粉末状（注意：切莫使组织冻融）
7．放进一个1.5毫升离心管
8．加入预冷的xx微升至1毫升裂解液（Reagent H）
9．强力涡旋震荡30秒，充分混匀
10．放进DOUNCE匀浆器里匀浆80下
11．将匀浆液转移到1.5毫升离心管
12．放进4℃微型台式离心机离心15分钟，速度为10000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
17．小心移取上清液到新的1.5毫升离心管
18．移取10微升进行蛋白定量检测（注意：建议使用 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－G&VS30030.1）
19．即刻放进－70℃保存或置于冰槽里继续后续操作

二、测定准备
1．准备好待测样品（例如组织裂解萃取液样品等），置于冰槽里
2．设定好分光光度仪（温度为37℃）：波长585nm
3．准备好5个1.5毫升离心管，标记为1至5号管
4．分别加入xx微升缓冲液（Reagent A）到2至5号离心管
5．移取xx毫升升标准液（Reagent F）到1号管，混匀
6．小心移取xx微升1号管的标准液（Reagent F）到2号管，混匀
7．小心移取xx微升2号管稀释的标准液（Reagent F）到3号管，混匀
8．小心移取xx微升3号管稀释的标准液（Reagent F）到4号管，混匀
9．将1至5号管放进冰槽里备用，避免光照；标准管浓度见下表

管号    缓冲液（Reagent A）        标准液（Reagent F）         标准N-乙酰葡糖胺浓度
1    xx微升            xx微升            200微摩尔/升
2    xx微升            xx微升1号管        100微摩尔/升
3    xx微升            xx微升2号管        50微摩尔/升
4    xx微升            xx微升3号管        25微摩尔/升
5    xx微升            空对照            0

三、标准曲线测定
1．移取45微升上述配制的标准液到新的1.5毫升离心管
2．加入xx微升终止液（Reagent D），混匀
3．放进100℃煮沸3分钟（注意：很重要）
4．放进冰槽里1分钟
5．加入xx微升显色液（Reagent E），混匀
6．放进37℃恒温水槽孵育20分钟
7．转移到500微升比色皿
8．即刻放进分光光度仪检测：获得吸光读数（OD）
9．重复实验步骤1至8，测读完所有标准样品
10．实际吸光读数：标准样吸光读数－5号管标准样吸光读数（作为空对照）
11．构建标准曲线：纵座标（Y轴）为实际吸光读数（OD）；横座标（X轴）为标准N-乙酰葡糖胺浓度（微摩尔/升）

四、样品测定
1．移取xx微升缓冲液（Reagent A）到1.5毫升离心管
2．加入xx微升反应液（Reagent B）
3．加入xx微升底色液（Reagent C）
4．加入50微升待测样品（100微克组织裂解萃取液蛋白）到样品管（注意：样品须清澈）
5．盖上盖子，上下倾倒数次，混匀
6．在37℃温度下孵育60分钟
7．移出45微升上述反应产物到新的1.5毫升离心管
8．加入xx微升终止液（Reagent D），混匀
9．放进100℃煮沸3分钟（注意：很重要）
10．放进冰槽里1分钟
11．加入xx微升显色液（Reagent E），混匀
12．放进37℃恒温水槽孵育20分钟
13．转移到500微升比色皿
14．即刻放进分光光度仪检测
15．实际吸光读数：样品管读数－5号管标准样吸光读数（作为空对照）
16．根据标准曲线获得样品对应N-乙酰葡糖胺浓度（微摩尔/升）
17．计算样品活性：

注意事项
1．本产品为20次（比色皿）操作，包括背景对照
2．操作时，须戴手套
3．终止液（Reagent D）和显色液（Reagent E）具有腐蚀性，注意操作安全
4．反应时间可以在10至60分钟之间进行
5．比色测定后，比色皿须清洗彻底
6．建议待测样本蛋白浓度为100微克/50微升（本公司提供 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒G&VS30030.1）
7．如果待测样品浓度过高或过低，可以调整样品浓度
8．透明质酸酶单位活性定义为：在37℃，pH 3.5条件下，每分钟内能够使1微摩尔透明质酸水解产生还原性N-乙酰葡糖胺所需的酶量作为一个活性单位
9．本公司提供系列透明质酸酶检测试剂产品

质量标准
1．本产品经鉴定性能稳定
2．本产品经鉴定检测敏感

使用承诺
上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒
IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息
单组分订购信息
编号        名称                        规格
G&VS50894.2    组织透明质酸酶活性Mogan-Elson比色法定量检测试剂盒    20次
G&VS50894.2A    缓冲液（Reagent A）                    毫升
G&VS50894.2B     反应液（Reagent B）                    毫升
G&VS50894.2C     底色液（Reagent C）                    毫升
G&VS50894.2D     终止液（Reagent D）                毫升
G&VS50894.2E     显色液（Reagent E）                    毫升
G&VS50894.2F     标准液（Reagent F）                    毫升
G&VS50894.2G     清理液（Reagent G）                毫升
G&VS50894.2H     裂解液（Reagent H）                毫升

试剂盒订购信息
产品编号        名称                                规格
G&VS50893.1    细胞透明质酸酶（hyaluronidase）活性All-Stains定量检测试剂盒            20次
G&VS50893.2    组织透明质酸酶（hyaluronidase）活性All-Stains定量检测试剂盒            20次
G&VS50893.3    体液透明质酸酶（hyaluronidase）活性All-Stains定量检测试剂盒            20次
G&VS50894.1    细胞透明质酸酶（hyaluronidase）活性Mogan-Elson比色法定量检测试剂盒        20次
G&VS50894.2    组织透明质酸酶（hyaluronidase）活性Mogan-Elson比色法定量检测试剂盒        20次
G&VS50894.3    体液透明质酸酶（hyaluronidase）活性Mogan-Elson比色法定量检测试剂盒        20次
G&VS50895.1    细胞透明质酸酶（hyaluronidase）活性Mogan-Elson荧光定量检测试剂盒        20次
G&VS50895.2    组织透明质酸酶（hyaluronidase）活性Mogan-Elson荧光定量检测试剂盒        20次
G&VS50895.3    体液透明质酸酶（hyaluronidase）活性Mogan-Elson荧光定量检测试剂盒        20次
G&VS50896.1    细胞透明质酸酶（hyaluronidase）活性浊度法（burbidmetric）定量检测试剂盒    20次
G&VS50896.2    组织透明质酸酶（hyaluronidase）活性浊度法（burbidmetric）定量检测试剂盒    20次
G&VS50896.3    体液透明质酸酶（hyaluronidase）活性浊度法（burbidmetric）定量检测试剂盒    20次