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H2S含量测定试剂盒说明书微板法

发布时间：2025/7/14 12:03:56 阅读次数：26

H2S含量测定试剂盒说明书微板法
有效期：6个月

一、产品简介：
H2S被认为是细胞内第三种气体信号分子，在植物体内，参与植物生长发育、增强生物以及非生物抗逆性，延缓植物衰老的多种生理过程。在动物体内，对神经系统有调节作用，还可舒张血管平滑肌，降低血压。
在Fe+3(作为氧化剂)存在的强酸性条件下，硫化氢与N,N-二甲基对苯二胺反应生成蓝色的亚甲蓝，亚甲蓝在665nm处有最大吸收峰，故可根据亚甲蓝生成的量来计算植物组织中的H2S的含量。

二、测试盒组成和配制：
试剂名称    规格                       保存要求
提取液    液体100mL×1瓶        4℃保存
试剂一    液体2mL×1瓶            4℃保存
试剂二    液体2mL×1瓶            4℃保存

三、所需的仪器和用品：
酶标仪、96孔板、可调式移液器、天平、低温离心机、蒸馏水。

四、H2S含量测定：
建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！
1、样本制备：
① 组织样本：
称取约0.1g组织，加入1mL提取液，进行冰浴匀浆。12000rpm，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
【注】:若增加样本量，可按组织质量（g）：提取液体积(mL)为1:5~10的比例进行提取
② 细菌/细胞样本：
先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取500万细菌或细胞加入1mL提取液；冰浴超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；12000rpm，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
【注】:若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（104）：提取液体积(mL)为500~1000:1比例进行提取。
③ 液体样本：直接检测，若浑浊则离心后取上清检测。
2、上机检测：
① 酶标仪预热30min，调节波长至665nm。
② 在96孔板中依次加入：
试剂名称（μL）    测定管    空白管（仅做一次）
上清液                     160
蒸馏水                                    160
试剂一             20           20
试剂二                 20           20
混匀，室温（25℃）反应15min，于665nm处读取吸光值A，△A=A测定-A空白。

五、结果计算：
1、标准曲线方程：y =7.6577x-0.0014，x是标准品摩尔质量（μmol），y是△A。
2、按照样本重量计算：
H2S(μmol/g 鲜重)=(△A+0.0014)÷7.6577÷(V1÷V×W)
=0.82×(△A+0.0014)÷W
3、按细胞/细菌数量计算：
H2S(μmol/104个)=(△A +0.0014)÷7.6577÷(V1÷V×细胞数量)
=0.82×(△A+0.0014)÷细胞数量
4、按照液体体积：
H2S(μmol/mL)=(△A+0.0014)÷7.6577÷V1=0.82×(△A+0.0014)
V---加入提取液体积，1mL； V1---反应中样品体积，0.16mL；   W----样品质量，g。