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大肠杆菌NovaBlue（DE3）化学感受态细胞

发布时间：2025/8/15 10:07:16 阅读次数：62

CAT#:JW-26-060
干冰运输、-80℃保存

大肠杆菌NovaBlue(DE3)化学感受态细胞

产品及特点
大肠杆菌NovaBlue(DE3)来源于K12菌株，具有极高的转化效率。该菌株DNA中整合了l噬菌体DE3区，使用pUC19质粒（2686bp，AmpR）检测，转化效率达10E9 cfu/μg DNA。本产品是采用大肠杆菌NovaBlue(DE3)菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，其基因型是：F´[proA+B+lacIq ZΔM15::Tn10 (TetR)], endA1, hsdR17(rk12-,mk12+), supE44, thi-1, recA1, gyrA96, relA1 lac(DE3)。

本产品具有下列特点：
1.endA1和recA1突变，有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。
2.存在lacZΔM15，可用于蓝、白斑筛选。
3.是转化效率最高的原核表达菌株，可同时用于普通质粒的构建和蛋白的原核表达。
4.可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶，用于pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达。
5.菌株具有四环素抗性。
6.本产品足够10次100 mL的转化实验。
7.本产品只能用于科研。

规格及成分
本产品采用十二孔盒包装
成分                                      编号             规格                   包装
大肠杆菌NovaBlue(DE3)
化学感受态细胞                    26-060a        100 mL×10    1.5 mL压盖管
使用手册                       26-060sc        1份                   无

运输及保存
干冰运输、-80℃保存，有效期6个月，避免反复冻融。

自备试剂
目的DNA，2YT或LB液体培养基（含四环素抗性）

使用方法
1.取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100 mL，可以根据实际情况分装使用。以下实验以50 mL感受态细胞为例。
2.待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加待转化的DNA溶液（质粒DNA或连接反应液），如果是纯化好的质粒DNA，可以加1 ng，如果是连接反应液，可以加1-3 mL。
3.用移液器轻轻吹打混匀后冰浴30分钟。
4.42℃热击45-60秒。此步对转化非常重要，时间长短也需要准确。
5.迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。
6.每个离心管中加入1 mL无菌的2YT或LB液体培养基（含四环素抗性）混匀。
7.37℃摇床200 rpm振荡培养60分钟使抗菌素基因表达。
8.取100 mL涂盘到含有四环素和质粒抗菌素基因对应的抗生素的2YT或LB固体培养皿上。剩下的900 mL菌液可以放4℃，等转化结果出来后再处理。如果转化菌落数过少，可以将剩下的菌液离心弃800 mL上清（培养基），用剩下的100 mL培养基重悬细菌后再涂盘。
9.将平板平放于37℃直至液体被吸收（一般需要10分钟）。
10.倒置培养，37℃培养12-16小时。

关联产品
即用型LB培养基（含各种抗生素）