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大肠杆菌DH5α化学感受态细胞

发布时间：2025/8/15 10:14:25 阅读次数：53

CAT#:JW-26-001
干冰运输、-80℃保存

大肠杆菌DH5α化学感受态细胞

产品及特点
本产品是采用大肠杆菌DH5α菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。
DH5α是一种常用于质粒克隆的菌株，其φ80lac ZΔM15基因产物可与载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α互补，可用于蓝白斑筛选。recA1和endA1的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。使用pUC19质粒检测，转化效率可达10E8转化子/μg质粒左右，适用于高效的质粒DNA克隆并能保证高拷贝质粒的稳定复制。
DH5α的基因型和表现型如下：
基因型                               表现型
deo R                      组成型合成脱氧核糖
end A1                       核酸内切酶I缺失
gyr A96                      具有萘啶酮酸抗性
hsd R17                       限制性酶EcoK缺失
△(lac)U169                   lac基因缺失
rec A1                      DNA重组活性降低
relA1                            允许在无蛋白质合成时有RNA合成
sup E44                        抑制琥珀突变，为某些噬菌体必需
thi-1                          不能自身合成硫氨
φ80（lac ZΔM15）提供α-互补所需的ω片断

规格及成分
成分                                                编号          规格            包装
大肠杆菌DH5α化学感受态细胞    26-001a    100μL×10    1.5mL压盖管
使用手册                                 26-001sc    1份                  无
本产品采用塑料袋包装

运输及保存
干冰运输、-80℃保存，有效期半年。

自备试剂
SOC或LB培养基（不含抗生素）

使用方法
1.取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μL，可根据实际情况分装使用。以下实验以50μL感受态细胞为例。
2.待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加待转化的DNA溶液（质粒DNA或连接反应液），如果是纯化好的质粒DNA，可以加1ng，如果是连接反应液，可以加1-3μL。
3.用移液器轻轻吹打混匀后冰浴30分钟。
4.42℃热击45-60秒。此步对转化非常重要，时间长短也需要准确。
5.迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。
6.每个离心管中加入1mL无菌的SOC或LB液体培养基（不含抗生素）混匀。
7.37℃摇床200rpm振荡培养60分钟使抗菌素基因表达。
8.取100μL涂盘到含有跟质粒抗菌素基因对应的抗生素的SOC或LB固体培养皿上。剩下的900μL菌液可以放4℃，等转化结果出来后再处理。如果转化菌落数过少，可以将剩下的菌液离心弃800μL上清（培养基），用剩下的100μL培养基重悬细菌后再涂盘。
9.将平板平放于37℃直至液体被吸收（一般需要10分钟）。
10.倒置培养，37℃培养12-16小时。

关联产品
即用型LB培养基（含各种抗生素）