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大肠杆菌MG1655化学感受态细胞

发布时间：2025/8/15 10:17:03 阅读次数：72

CAT#:JW-26-029
干冰运输、-80℃保存

大肠杆菌MG1655化学感受态细胞

产品及特点
本产品是大肠杆菌MG1655菌株的化学感受态细胞，它具有下列特点：
1.大肠杆菌MG1655菌株外观形态标准，其DNA可做为扩增大肠杆菌WT型基因的模板使用，本菌种可作为蛋白表达的宿主菌株使用。
2.大肠杆菌MG1655菌株来源于W1485菌株，是K12的衍生菌株，是一种经过较少改造，比较接近于“WT-野生型”的大肠杆菌工程菌株。
3.大肠杆菌MG1655菌株不含核酸酶endA1突变，体内核酸酶含量较高，提取质粒时推荐使用质粒提取试剂盒中去蛋白液以去除菌体内大量的核酸酶，以防提取的质粒被降解。
4.大肠杆菌MG1655感受态细胞经特殊工艺制作，用pUC19质粒（2686bp，AmpR）检测转化效率为>0.5×108 cfu/μg DNA。
5.基因型为K12 F- lambda- ilvG- rfb-50 rph-1
6.本产品足够10次100μL的转化实验。
7.本产品只能用于科研。
规格及成分
本产品采用十二孔盒包装
成分                        编号            规格                包装
大肠杆菌MG1655
化学感受态细胞   26-029a    100mL×10    1.5mL压盖管
使用手册                26-029sc    1 份               无

运输及保存
干冰运输、-80℃保存，有效期半年；

自备试剂
2YT或LB培养基（不含抗生素）

使用方法
1.将MG1655感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。请注意感受态细胞最好在冰中缓慢融化，在插入冰中8分钟内加入目标 DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。
2.42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3.向离心管中加入700μL不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB)，混匀后 37℃，200 rpm复苏60分钟。
4.5000rpm离心1分钟收集菌体，留取100μL左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少15h。

关联产品
即用型LB培养基（含各种抗生素）