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EB病毒介导永生化淋巴细胞系微量全血制备试剂盒产品说明书

发布时间：2025/8/15 14:19:31 阅读次数：25

EB病毒介导永生化淋巴细胞系微量全血制备试剂盒产品说明书

主要用途
EB病毒介导永生化淋巴细胞系微量全血制备试剂是一种旨在使用高滴度EB病毒直接感染新鲜或冻存的微量全血样品，产生永久繁殖的类淋巴母细胞细胞系（lymphoblastoid cell line）的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适合于各种新鲜或冻存的正常和疾病人体、动物微量全血样品中淋巴细胞永生化的制备。其制备效率高，活力保证。产品即到即用，严格无菌，性能稳定。

技术背景
爱泼斯坦巴尔病毒（Epstein-Barr virus；EBV），又称为人类疱疹病毒4（human herpesvirus 4），是Anthony Epstein和Yvonne Barr于1964年首次成功地将丹尼斯伯基特（Danis Burkitt）发现的非洲儿童淋巴瘤细胞通过体外悬浮培养而建株，并在建株细胞涂片中用电镜观察到疱疹病毒颗粒而命名的。其中，人体Hawley EB病毒株作为转化型病毒，广泛用于体外转化静息B淋巴细胞，在细胞毒性T细胞抑制剂的帮助下，通过CD21（CR2）受体进入B细胞，产生永生化类淋巴母细胞系（immortalized lymphoblastoid cell line），不断繁殖，从而提供免疫、分子和功能研究的生物源材料，以及基因组DNA的原始材料，同时长期保存各种疾病相关性细胞库；用于研究EB病毒本身的潜伏性和肿瘤生成机制；用于制备单克隆抗体和MHC蛋白抗原等。从新鲜或冻存的微量全血中制备永生化淋巴细胞系的方法具有简便、采血少、无需细胞分离、费用节约、成功率高达90%等优点。

产品内容
培养液（Reagent A）        毫升
抑制液（Reagent B）        微升
转化液（Reagent C）        微升
产品说明书        1份

保存方式
保存培养液（Reagent A）在4℃冰箱里，抑制液（Reagent B）在－20℃冰箱里，转化液（Reagent C）在-70℃冰箱里，避免反复冻融，注意生物安全；有效保证3月

用户自备
2毫升离心管：用于样品操作的容器
15毫升圆底离心管：用于样品操作的容器
25和75cm2细胞培养瓶：用于细胞培养的容器
二氧化碳细胞培养箱：用于细胞培养
4℃台式离心机：用于样品操作
光学显微镜：用于观察细胞形态

实验步骤
实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂置于冰槽里冻融，同时将培养液（Reagent A）置于37℃恒温水槽预热。然后进行下列操作。
1．准备好新鲜采集或冻存的800微升全血样品
2．转移到2毫升离心管
3．放进微型台式离心机离心10分钟，速度为600g
4．小心抽去上清液
5．加入xx毫升预热的培养液（Reagent A），混匀细胞颗粒群
6．放进微型台式离心机离心10分钟，速度为600g
7．小心抽去上清液
8．加入xx微升预热的培养液（Reagent A），混匀细胞颗粒群
9．转移到15毫升圆底离心管
10．加入xx微升抑制液（Reagent B），充分混匀
11．置于37℃恒温水槽快速冻融1管转化液（Reagent C）
12．加入xx微升转化液（Reagent C）到离心管里，充分混匀
13．竖立放进37℃二氧化碳培养箱里孵育5天（注意：务必不要等到溶液颜色为纯黄色）
14．小心抽去800微升上层陈旧培养液（注意：不要触及管底细胞层）
15．加入xx微升新鲜的培养液（Reagent A），混匀
16．竖立放进37℃二氧化碳培养箱里继续孵育5天
17．重复实验步骤14至16五次
18．转移到25cm2细胞培养瓶里
19．加入xx毫升新鲜的培养液（Reagent A），混匀
20．竖立放进37℃二氧化碳培养箱里孵育1周（注意：溶液颜色为桔红色，换液为佳，务必不要等到溶液颜色为纯黄色）
21．每隔1周换液一次，持续3周（注意：可见细胞成较大团聚集，且细胞总量达5 X 106）
22．转移到50毫升75cm2培养瓶里继续培养或分装成1 X 106 细胞/毫升/管冻存
23．（选择步骤）传代培养：1 X 105/毫升
24．光学显微镜观察：5至8周后成团细胞形态（10 X）

注意事项
1．本产品为10次操作
2．所有操作均须在无菌状态下进行
3．操作时，须戴手套和防护口罩
4．操作时，注意生物安全；培养废液专门收集和消毒处理
5．转化液（Reagent C）具有有害性，切忌用手接触，做好防护
6．通常5周时间可以制备永生化细胞
7．用户可以使用淋巴细胞分离试剂盒（G&VS10038.2）去除红细胞残渣
8．分离的淋巴细胞活力检测建议使用细胞活力台盼蓝染色试剂盒－G&VS10009
9．本公司提供系列永生化细胞制备产品

质量标准
1．本产品经鉴定性能稳定
2．本产品经鉴定制备的细胞维持正常活性

使用承诺
极威生物秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒
IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息
单组分订购信息
编号            名称                规格
G&VS10031.2    EB病毒介导永生化淋巴细胞系微量全血制备试剂盒    10次
G&VS10031.2A    培养液（Reagent A）                毫升
G&VS10031.2B    抑制液（Reagent B）                微升
G&VS10031.2C    转化液（Reagent C）                微升

试剂盒订购信息
产品编号            名称                规格
G&VS10031.1    EB病毒介导永生化淋巴细胞系制备试剂盒        10次
G&VS10031.2    EB病毒介导永生化淋巴细胞系微量全血制备试剂盒    10次
G&VS10031.3    EB病毒介导永生化HPRT（—）淋巴细胞系克隆试剂盒    10次
G&VS10038.1    血白细胞分离试剂盒                10次
G&VS10038.2    单核白细胞/淋巴细胞分离试剂盒            10次
G&VS10038.4    动物单核白细胞/淋巴细胞分离试剂盒        10次
G&VS12137.1    淋巴细胞完全培养液                500毫升
G&VS12137.2    淋巴细胞增长培养液                500毫升
G&VS12137.3    淋巴细胞基础培养液                500毫升