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TUNEL 流式细胞仪分析试剂盒产品说明书

发布时间：2025/8/15 14:21:38 阅读次数：66

TUNEL 流式细胞仪分析试剂盒产品说明书

主要用途
TUNEL 流式细胞仪分析试剂是一种旨在使用标准化的生物酶方法，探寻组织或细胞中的 DNA 断点，即运用修饰过的核苷酸，在末端脱氧核糖核酸转移酶(TdT) 的帮助下，对 DNA 单链或双链上断点处的 3’末端进行标记，通过双重参数细胞流式仪定量分析单细胞水平的 DNA 降解状况的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。主要适用于各种组织或细胞(动物、人体、植物等) 的 DNA 降解测定。广泛用于细胞凋亡的研究。产品严格无菌，即到即用，反应敏感，操作简捷，性能稳定。

技术背景
细胞凋亡，或细胞程序性死亡，在诸如形态发育、免疫系统调节、以及肿瘤和神经退行性疾病等各种生物学过程中，起着实质性的作用。凋亡细胞具有形态、生化、和分子方面的显著特征。其中内源性核酸酶的激活，将 DNA 链在核小体间连接区切成缺口，使核内DNA 断裂成小片断。在组织细胞原位 DNA 切口处可被末端脱氧核糖核酸转移酶(TdT)标记上生物素 dUTP，即 TUNEL(Terminal deoxynucleotidyl Transferase Biotin-dUTP Nick End Labeling)，然后借助细胞流式仪，探测断点 DNA 的信息和测定出 DNA 含量的变化。流式细胞术(FLOW CYTOMETRY) 是七十年代发展起来的集计算机、激光、流体力学、细胞化学、细胞免疫学为一体的高科学技术。

产品内容
固着液(Reagent A)        毫升
通透液(Reagent B)        毫升
润湿液(Reagent C)        毫升
反应液(Reagent D)        微升
酶解液(Reagent E)        毫升
终止液(Reagent F)        毫升
缓冲液(Reagent G)        毫升
染色液 A (Reagent H)    毫升
清理液(Reagent I)        毫升
染色液 B (Reagent J)        毫升
产品说明书        1 份

保存方式
保存通透液(Reagent B)、反应液(Reagent D)、酶解液(Reagent E)、染色液 A (Reagent H)和染色液 B (Reagent J)在－20℃冰箱里，其余的保存在 4℃冰箱里；反应液(Reagent D)严禁反复冻融；染色液 A(Reagent H)和染色液 B(Reagent J)，避免光照；有效保证 6 月

用户自备
胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液(G&VS12024)：用于细胞脱离
完全细胞培养液(G&VS12052)：用于中和胰蛋白酶的处理
15 毫升锥形离心管：用于细胞收集的操作
1.5 毫升离心管：用于细胞染色的容器台式离心机：用于细胞收集的操作
台式微型离心机：用于细胞收集的操作
细胞流式仪：用于细胞荧光分析

实验步骤
实验开始前，将－20℃冰箱里试剂盒中的试剂置入冰槽里融化。然后进行下列操作：
1 ．准备 1 个 6 孔细胞培养板的细胞(5 X 105细胞/孔)
2 ．小心抽取细胞培养液到 15 毫升锥形离心管
3 ．加入 1 毫升用户自备的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液
4 ．放进 37℃细胞培养箱孵育 1 分钟
5 ．加入 3 毫升用户自备的完全细胞培养液
6 ．移取细胞混匀液到上述 15 毫升锥形离心管
7 ．放进台式离心机离心 10 分钟，速度为 400g(或 1500rpm，例如 EPPENDORF 5810R)
8 ．小心抽去上清液
9 ．加入 xx 微升 4℃预冷的固着液(Reagent A)，上下抽吸混匀
10．放进冰槽里孵育 15 分钟
11．同时准备 1 个－20℃预冷的新的 15 毫升锥形离心管
12．加入 5 毫升－20℃预冷的通透液(Reagent B)
13．用 1000 微升枪头移取细胞混匀液，一滴一滴加入到－20℃预冷的通透液(Reagent B) 里，保持摇动离心管(如暂时停止，可放进－20℃冰箱里保存)
14．放进台式离心机离心 10 分钟，速度为 400g(或 1500rpm，例如 EPPENDORF 5810R)
15．小心抽去上清液
16．加入 xx 微升润湿液(Reagent C)，用枪头混匀
17．移入到 1.5 毫升离心管
18．放进微型台式离心机离心 5 分钟，速度为 800g(或 3000rpm，例如 EPPENDORF 5415D)
19．小心抽去上清液
20．加入 xx 微升反应液(Reagent D)，用枪头混匀
21．放进 37℃细胞培养箱孵育 60 分钟
22．放进微型台式离心机离心 5 分钟，速度为 800g(或 3000rpm，例如 EPPENDORF 5415D)
23．小心抽去上清液
24．加入 xx 毫升酶解液(Reagent E)，用枪头混匀
25．转移到新的 1.5 毫升离心管
26．在室温下孵育 30 分钟
27．放进微型台式离心机离心 5 分钟，速度为 800g(或 3000rpm，例如 EPPENDORF 5415D)
28．小心抽去上清液
29．加入 xx 毫升终止液(Reagent F)，用枪头混匀
30．在室温下孵育 30 分钟
31．放进微型台式离心机离心 5 分钟，速度为 800g(或 3000rpm，例如 EPPENDORF 5415D)
32．小心抽去上清液
33．加入 xx 毫升缓冲液(Reagent G)，用枪头混匀
34．放进微型台式离心机离心 5 分钟，速度为 800g(或 3000rpm，例如 EPPENDORF 5415D)
35．小心抽去上清液
36．加入 xx 微升染色液 A (Reagent H)，用枪头混匀
37．在室温下孵育 30 分钟
38．加入 xx 毫升清理液(Reagent I)，用枪头混匀
39．放进微型台式离心机离心 5 分钟，速度为 800g(或 3000rpm，例如 EPPENDORF 5415D)
40．小心抽去上清液
41．重复实验步骤 38 至 40 两次(注意：可能肉眼难以看见细胞颗粒群)
42．加入 xx 微升染色液 B (Reagent J)，用枪头混匀
43．移入到细胞流式仪专用测试管(可放进 4℃冰箱里待测)
44．即刻进行细胞流式仪分析：波长 488nm 氩离子激光器，观察 50000 个细胞以上
45．建立地形图或散点图以及直方图分析
    染色液 A (Reagent H)    染色液 B (Reagent J)
荧光染料    异硫氰酸荧光素(FITC)        碘化丙啶 (Propidium iodide；PI)
荧光颜色    绿色            红色
阳性    双峰： DNA 断裂；细胞凋亡    亚二倍体峰：细胞凋亡
散发波长    530            575 (使用 phycoerythrin 的信号检测)
流式仪通道    FL1        FL2

注意事项
1．本产品为 10 次操作量
2．在整个操作过程中须戴手套，以防污染
3．确保实验准确性，须收集所有悬浮和贴壁细胞
4．孵育时，必须避免光照
5 ．建议细胞染色完成后，即刻进行细胞流式仪分析。如果放进 4℃冰箱里待测，不要超过 3 天
6 ．细胞流式仪分析前，须混匀内容物
7 ．细胞检测量不得少于 10000 个
8 ．务必测试正常对照组
9 ．检测时，须弥补电子补偿，以去除双重参数的光谱重叠
10．告知流式仪技术员有关细胞类型
11．本公司提供细胞流式仪分析外包服务
12．本公司提供系列细胞凋亡检测试剂产品

质量标准
1 ．本产品经鉴定性能稳定
2 ．本产品经鉴定显色清晰

使用承诺
极威生物秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后 10 天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式(实验报告)与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒
IF IT DOESN’T WORK ， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息
编号        名称            规格
G&VS10032    TUNEL 流式细胞仪分析试剂盒    10 次
G&VS10032A    固着液(Reagent A)        50 毫升
G&VS10032B    通透液(Reagent B)        500 毫升
G&VS10032C    润湿液(Reagent C)        50 毫升
G&VS10032D    反应液(Reagent D)        1 毫升
G&VS10032E    酶解液(Reagent E)        50 毫升
G&VS10032F    终止液(Reagent F)        100 毫升
G&VS10032G    缓冲液(Reagent G)        100 毫升
G&VS10032H    染色液 A (Reagent H)    5 毫升
G&VS10032I    清理液(Reagent I)        100 毫升
G&VS10032J    染色液 B (Reagent J)        50 毫升

产品编号        名称                    规格
G&VS10021. 1    通用型细胞周期流式细胞分析试剂盒        100 次
G&VS10021.2    细胞周期蓝色荧光流式细胞分析试剂盒(紫外波长，无需固定和透膜处理)    100 次
G&VS10021.3    细胞周期碘化丙啶(PROPIDIUM IODIDE) 红色荧光流式细胞分析试剂盒    100 次
G&VS10022. 1    细胞 TUNEL 显色法(DAB) 测定试剂盒        10/20 次
G&VS10022.2    冰冻切片 TUNEL 显色法(DAB)测定试剂盒        10 次
G&VS10022.3    石蜡切片 TUNEL 显色法(DAB)测定试剂盒        10 次
G&VS10022.4    细胞 TUNEL 荧光法(Fluorescein)测定试剂盒        10 次
G&VS10022.5    冰冻切片 TUNEL 荧光法(Fluorescein)测定试剂盒    10 次
G&VS10022.6    石蜡切片 TUNEL 荧光法(Fluorescein)测定试剂盒    10 次
G&VS10091. 1    细胞 KUNEL 测定试剂盒            10 次
G&VS10091.2    冰冻切片 KUNEL 测定试剂盒            10 次
G&VS10091.3    石蜡切片 KUNEL 测定试剂盒            10 次
G&VS10011.2    蓝色荧光细胞核染色分析试剂盒            100 次
G&VS10023. 1    通用型细胞核形态染色试剂盒            100 次
G&VS10023.2    PROPIDIUM IODIDE 细胞核形态染色试剂盒        100 次
G&VS10023.3    CHROMOMYCIN A3 细胞核形态染色试剂盒    50 次
G&VS10092    HOECHST 33342 和 PROPIDIUM IODIDE 细胞膜变检测试剂盒    50 次
G&VS10032    TUNEL 流式细胞仪分析试剂盒            10 次
G&VS10042. 1    动物细胞/组织细胞色素 C 释放凋亡检测试剂盒    10 次
G&VS10042.2    植物细胞色素 C 释放凋亡检测试剂盒        10 次
G&VS40071    石蜡切片组织细胞色素 C 免疫组织化学检测试剂盒    10/20 次
G&VS20013    细胞调亡 DNA 条带检测试剂盒            10 次
G&VS10046    G-B 细胞活力和凋亡检测试剂盒            50 次
G&VS10051    ATP 生物发光法细胞繁殖与毒性定量检测试剂盒    50 次
G&VS10052    R-G 细胞活力和凋亡检测试剂盒            50 次
G&VS10132    ANNEXIN V－FITC 标记法早期细胞凋亡检测试剂盒    10/20 次
G&VS10136    Phalloidin－FITC 标记法中期细胞凋亡检测试剂盒    20 次
G&VS10148. 1    细胞凋亡诱导(DNA 合成抑制)试剂盒        20 次
G&VS10148.2    细胞凋亡诱导(DNA 损伤) 试剂盒            20 次
G&VS10148.3    细胞凋亡诱导(DNA 酶抑制)试剂盒        20 次