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Rosetta-gami B（DE3）化学感受态细胞

发布时间：2025/8/18 10:32:26 阅读次数：14

CAT#:JW-26-044
干冰运输、-80℃保存

Rosetta-gami B(DE3)化学感受态细胞

产品及特点
本产品是采用大肠杆菌Rosetta-gami B(DE3)菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞。Rosetta-gami B（DE3）菌株聚合了BL21，Tuner，Origami和Rosetta四种菌株的优点。其基因型为：F- ompT hsdSB(rB-mB-) gal dcm lacY1 ahpC (DE3) gor522::Tn10 trxB pRARE (CamR, KanR, TetR)
Rosetta-gami B(DE3)的基因型和表现型列表如下：
基因型        表现型
F-         不携带F质粒
ompT        外膜蛋白酶VII缺失，对表达蛋白的降解减弱
hsdSB(rB- mB-)    限制/甲基化系统失活
gal         不能利用半乳糖
dcm        不会在特定位点的胞嘧啶上形成甲基化
lacY1        半乳糖苷通透酶突变，不能转入半乳糖，使 IPTG 诱导增效
ahpC        编码烯酰基还原酶,参与氧化-应激应答的表达,它能控制解毒酶基因的如katG 基因的表达
(DE3)        染色体上携带溶原型的lambda DE3噬菌体，其上有受lacUV5 启动子控制的T7 RNA聚合酶基因，在IPTG的诱导下能大量产生T7 RNA聚合酶
gor522::Tn10     Tn10插入到编码谷胱甘肽还原酶的gor基因中，导致谷胱甘肽还原酶缺失，有利于二硫键形成
trxB        导致硫氧还蛋白氧化还原酶失活，促进胞浆内二硫键形成
CamR        已更新成ChlR,氯霉素抗性，由pRARE质粒携带
KanR        卡拉霉素抗性，由pRARE质粒携带
TetR        四环素抗性，由pRARE质粒携带

规格及成分
本产品采用小立盒包装
成分                                编号           规格               包装
Rosetta-gami B(DE3)
化学感受态细胞             26-044a    100mL×10    0.5mL压盖管
pUC19 (10pg/mL)          26-044b    100mL        1.5mL白盖管
使用手册                        26-044sc    1 份               无

运输及保存
干冰运输、-80℃保存，有效期半年；

自备试剂
筛选培养基

使用方法
1.Rosetta-gamiB(DE3)感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的质粒，并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。
2.42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3.向离心管中加入700mL不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。
4.5000 rpm离心一分钟收菌，留取100mL左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含34 mg/mL氯霉素及所选质粒筛选抗生素的2YT或LB培养基上。
5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。
注意事项
1.感受态细胞最好在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。
2.混入质粒时应轻柔操作，转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
3.诱导时，IPTG浓度可选（0.1-2 mM均可）。
4.为获得需要量的蛋白，最佳诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。
5.Rosetta-gamiB (DE3)菌株携带pRARE质粒，除复苏培养基为无抗生素外，其余所用培养基、培养液均应含有34 mg/mL氯霉素，以防质粒丢失。
6.具有卡那霉素抗性，不能用于具有卡那霉素抗性质粒的表达。

关联产品
即用型LB培养基（含各种抗生素）