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大肠杆菌Rosetta-gami 2（DE3）化学感受态细胞

发布时间：2025/8/18 10:33:35 阅读次数：19

CAT#:JW-26-045
干冰运输、-80℃保存

大肠杆菌Rosetta-gami 2(DE3)化学感受态细胞

产品及特点
本产品是采用Rosetta-gami 2(DE3)菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的化学转化。Rosetta-gami 2(DE3)菌株集合了Rosetta 2和Origami 2两种菌株的优点。该菌株染色体整合了噬菌体DE3区。使用pUC19质粒检测，转化效率可达10E8转化子/μg质粒左右。
本产品的基因型是：D(ara-leu)7697 DlacX74 DphoA PvuII phoR araD139 ahpC galE galK rpsL (DE3) F’[lac+ lacIq pro] gor522::Tn10 trxB pRARE2 (CamR, StrR, TetR)
本产品具有下列特点：
1.适合T7启动子诱导的蛋白表达。
2.菌株不具有卡那霉素抗性，可用于具有卡那霉素抗性质粒的蛋白表达
3.菌株具有氯霉素，链霉素，四环素抗性。
4.本产品足够10次100 μL的转化实验。
5.本产品只能用于科研。

规格及成分
本产品使用十二孔盒包装
成分                                                编号            规格                    包装
大肠杆菌Rosetta-gami 2(DE3)
化学感受态细胞                               26-045    100 μL×10    1.5 mL 压盖管
使用手册                                         26-045sc    1 份                  无

运输及保存
干冰运输、-80℃保存，有效期6个月，避免反复冻融。

自备试剂
目的DNA、2YT或LB培养基（不含抗生素）

使用方法
1.取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μL，可以根据实际情况分装使用。以下实验以50μL感受态细胞为例。
2.待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加待转化的DNA溶液（质粒DNA或连接反应液），如果是纯化好的质粒DNA，可以加1 ng，如果是连接反应液，可以加1-3 μL。
3.用移液器轻轻吹打混匀后冰浴30分钟。
4.42℃热击45-60秒。此步对转化非常重要，时间长短也需要准确。
5.迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。
6.每个离心管中加入1mL 无菌的2YT或LB液体培养基（不含抗生素）混匀。
7.37℃摇床200 rpm 振荡培养60分钟使抗菌素基因表达。
8.取100μL涂盘到含有氯霉素和质粒抗菌素基因对应的抗生素的2YT或LB固体培养皿上。剩下的900μL菌液可以放4℃，等转化结果出来后再处理。如果转化菌落数过少，可以将剩下的菌液离心弃800μL上清（培养基），用剩下的100μL培养基重悬细菌后再涂盘。
9.将平板平放于37℃直至液体被吸收（一般需要10分钟）。
10.倒置培养，37℃培养12-16 小时。

自备试剂
即用型LB培养基（含各种抗生素）