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大肠杆菌Tuner（DE3）pLysS化学感受态细胞

发布时间：2025/8/18 10:40:10 阅读次数：8

CAT#:JW-26-057
干冰运输、-80℃保存

大肠杆菌Tuner(DE3)pLysS化学感受态细胞

产品及特点
本产品是采用大肠杆菌Tuner(DE3)pLysS菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。Tuner(DE3) pLysS是通过将具有氯霉素抗性的pLysS质粒导入Tuner(DE3)细胞中获得的。pLysS质粒能够表达T7溶菌酶，可以有效降低目的基因的基础表达水平，T7溶菌酶又可以与T7 RNA聚合酶结合抑制其转录活性，进而降低目的基因的背景表达水平，但不干扰IPTG诱导的表达。DE3是溶源性的lDE3，在lacUV5启动子下携带有T7 RNA聚合酶的染色体拷贝。该菌株染色体整合了l噬菌体DE3区，可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶。使用pUC19质粒检测，转化效率达10E7转化子/mg质粒左右。
本产品的基因型是：F-，ompT，hsdSB(rB-mB-)，gal，dcm，lacY1，(DE3)pLysS，CamR。
本产品具有下列特点：
1.适合毒性蛋白的原核表达。
2.可用于pET系列及其他T7启动子系列载体，pGEX，pMAL 等质粒的蛋白表达。
3.菌株具有氯霉素抗性。
4.本产品足够10次100 mL的转化实验。
5.本产品只能用于科研。

规格及成分
本产品采用十二孔盒包装
成分                                        编号              规格            包装
大肠杆菌Tuner(DE3)pLysS
化学感受态细胞                  26-057a       100 mL×10       1.5 mL压盖管
使用手册                                26-057sc       1 份                无

运输及保存
干冰运输、-80℃保存，有效期6个月，避免反复冻融。

自备试剂
目的 DNA，2YT或LB液体培养基（不含抗生素）

使用方法
1.取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100 mL，可以根据实际情况分装使用。以下实验以50 mL感受态细胞为例。
2.待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加待转化的DNA溶液（质粒DNA或连接反应液），如果是纯化好的质粒DNA，可以加1 ng，如果是连接反应液，可以加1-3 mL。
3.用移液器轻轻吹打混匀后冰浴30分钟。
4.42℃热击45-60秒。此步对转化非常重要，时间长短也需要准确。
5.迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。
6.每个离心管中加入1 mL无菌的2YT或LB液体培养基（不含抗生素）混匀。
7.37℃摇床200 rpm振荡培养60分钟使抗菌素基因表达。
8.取100 mL涂盘到含有氯霉素和质粒抗菌素基因对应的抗生素的2YT或LB固体培养皿上。剩下的900 mL菌液可以放4℃，等转化结果出来后再处理。如果转化菌落数过少，可以将剩下的菌液离心弃800 mL上清（培养基），用剩下的100 mL培养基重悬细菌后再涂盘。
9.将平板平放于37℃直至液体被吸收（一般需要10分钟）。
10.倒置培养，37℃培养12-16小时。

关联产品
即用型LB培养基（含各种抗生素）