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酵母INVSc1化学感受态细胞

发布时间：2025/8/18 10:41:28 阅读次数：43

CAT#:JW-26-095
干冰运输、-80℃保存

酵母INVSc1化学感受态细胞

产品及特点
本产品是由酵母INVSc1菌株制备的化学感受态细胞，可用于DNA转化。INVSc1菌株是专门用来做重组蛋白表达的宿主酵母，pYES2质粒与INVSc1酵母配套使用，激活pYES2质粒的GAL1启动子的转录进而启动下游重组蛋白的表达。INVSc1为合子型，可直接通过PEG/LiAc将pYES2质粒转化进入 INVSc1细胞内。

本产品基因型是：
MATa his3Δ1 leu2 trp1-289 ura3-52/MATα his3Δ1 leu2 trp1-289 ura3-52
本产品具有以下特点：
1.使用pYES2 质粒（5857bp，AmpR）检测转化效率>104 cfu/μg DNA。
2.质粒 pYES2 的筛选标志为 URA，可用 SD-URA 板进行筛选。
3.INVSc1 酵母菌株对高温敏感，最适生长温度为 27-30℃；高于 31℃，生长速度和转化效率呈指数下降。
4.本产品足够10次100mL的转化实验。
5.本产品只可用于科研。

规格及成分
本产品采用11孔盒包装
成分        编号        规格        包装
酵母INVSc1
化学感受态细胞    26-095a        100 μL×10    1.5 mL本色管
使用手册        26-095sc        1 份        无

运输及保存
干冰运输、-80℃保存，有效期三个月。

自备物品
目的质粒，SD-U medium板。

使用方法
一、实验方法
1.Carrier DNA的预处理：将Carrier DNA插入95℃金属浴5 min或插入浮漂中95℃水浴3 min，加热后快速插入冰中。
2.取100 μL冰上融化的酵母INVSc1感受态细胞，依次加入预冷的目的质粒 2-5 μg，预处理后的Carrier DNA 10 μL， PEG/LiAc 500 μL并吸打几次混匀，30℃水浴30 min（15 min时翻转6-8次混匀）。
3.将管放42℃水浴15 min（7.5 min 时翻转 6-8 次混匀）。
4.5000 rpm离心40 s弃上清，ddH2O400 μL重悬，离心30s弃上清。
5.ddH2O 50 μL重悬，涂质粒筛选用：SD-U medium板，29℃培养48-96 h。

二、培养基配制
6.质粒筛选用SD-U medium(1L):
Yeast Nitrogen base                           6.7g
葡萄糖                                                20g
Dropout(即 DO Supplement-Ura)              适量（按说明书）
补水到 1L，调 PH 至 5.8；
Agar                                          20g(for plates only);
121℃，15 min 高压灭菌。
7.蛋白诱导用Induction Medium SGR/-U(1L):
Yeast Nitrogen base                                6.7g
Dropout(即 DO Supplement-Ura)              适量（按说明书）
补水到 800 mL，调 PH 至 5.8；
121℃，15 min 高压灭菌；
待培养基温度降到55℃时，加入已过滤的carbon source:
20%半乳糖                                    100mL
10%棉子糖                                    100mL
注意：
8.感受态细胞最好在冰上融化。
9.转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

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