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大肠杆菌W3110化学感受态细胞

发布时间：2025/8/18 10:42:29 阅读次数：67

CAT#:JW-26-108
干冰运输、-80℃保存

大肠杆菌W3110化学感受态细胞

产品及特点
大肠杆菌W3110感受态细胞是采用特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的化学转化。使用pUC19质粒检测，转化效率10E8cfu/ugDNA以上。
本产品的基因型是：F—lambda—IN(rmD-rrnE)1rph-1
本产品具有下列特点：
1.本产品是将大肠杆菌K12菌种去除了F和lambda而得，可以作为大肠杆菌的野生菌种使用。
2.本产品足够10次100mL的转化实验。
3.本产品只能用于科研。
规格及成分
本产品采用十二孔盒包装
成分                                                  编号                规格               包装
大肠杆菌W3110化学感受态细胞      26-108a        100mL×10    1.5mL压盖管
使用手册                                            26-108sc        1份               无

运输及保存
干冰运输、-80℃保存，有效期6个月，避免反复冻融。

自备试剂：目的DNA、无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素)

使用方法
1.取感受态细胞置于冰浴中(解冻1-2分钟)，加入目的DNA，轻轻混匀，在冰浴中放置30分钟。注意:所使用DNA体积不要超过感受态细胞悬液体积的1/10，100mL感受态细胞能够饱和1ng超螺旋质粒DNA。
2.将离心管置于42℃水浴中敢置60-90秒，然后快速将管转移到冰浴中，使细胞冷却2-3分钟，该过程不要摇动离心管。
3.向每个离心管中加入500mL无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素)，混匀后置于37℃180rpm摇床震荡培养45-60分钟，目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。
4.根据实验要求(质粒，重组连接产物转化)，吸取适量体积已转化的感受态细胞加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上，将细胞均匀涂开。将平板置于室温直至液体被吸收，倒置平板，37℃培养12-16小时。
注意：刚刚化冻的细胞，转化效率最高。化冻后感受态细胞冰浴条件下，半小时内活性无明显变化，因此，同时转化多支感受态细胞时尽量半小时内加完目的DNA。感受态细胞应保存在-70℃，请避免反复冻融，以免降低感受态细胞的转化效率。进行转化操作时，请在无菌条件下，根据相应温度要求进行实验，避免用移液枪吹吸，整个过程要轻柔，尽量低温操作。

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即用型LB培养基（含各种抗生素）