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大肠杆菌HMS174（DE3）化学感受态细胞

发布时间：2025/8/18 10:43:32 阅读次数：13

CAT#:JW-26-109
干冰运输、-80℃保存

大肠杆菌HMS174(DE3)化学感受态细胞

产品及特点
HMS74(DE3)菌株是大肠杆菌K-12的衍生菌株。本产品是采用大肠杆菌HMS174(DE3)菌株经特殊工艺处理得到的化学感受态细胞，可用于DNA的化学转化。该菌株DNA中整合了噬菌体DE3区，使用pUC19质粒（2686bp，AmpR）检测，转化效率达10E7 cfu/μg DNA。其基因型是：F- recA1 hsdR (rK12- mK12+) (DE3) (RifR)

本产品具有以下特点：
HMS74菌株是大肠杆菌K-12的衍生菌株，含有recA突变。HMS174(DE3) 含有溶源的入DE3序列，可表达T7 RNA聚合酶，因而适用于pET系列载体及其他T7启动子系列的载体。与BLR(DE3)类似，可稳定表达那些能够导致噬菌体DE3序列丢失的特定基因。此外，该菌株携带利福霉素抗性。
1.菌株DNA中整合了噬菌体DE3区，可表达T7 RNA聚合酶，跟pET系列载体和其他T7启动子驱动的表达体系兼容。
2.与BLR(DE3)类似，可稳定表达能够导致噬菌体DE3序列丢失的特定基因。
3.含有recA突变，有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。
4.菌株具有利福霉素抗性。
5.本产品足够10次100 mL的转化实验。
6.本产品只可用于科研。

规格及成分
本产品采用12孔盒包装
成分                                                            编号           规格                包装
大肠杆菌HMS174(DE3)化学感受态细胞    26-109a    100μL×10        1.5mL 压盖管
使用手册                                                  26-109sc    1 份                  无

运输及保存
干冰运输、-80℃保存，有效期半年。

自备试剂
LB培养基（含利福平抗生素）

使用方法
1.取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μL，可以根据实际情况分装使用。以下实验以50μL感受态细胞为例。
2.待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加待转化的DNA溶液（质粒DNA或连接反应液），如果是纯化好的质粒DNA，可以加1 ng，如果是连接反应液，可以加1-3 μL。
3.用移液器轻轻吹打混匀后冰浴30分钟。
4.42℃热击60-90秒。此步对转化非常重要，时间长短也需要准确。
5.迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。
6.每个离心管中加入1mL 无菌的LB液体培养基（含利福平抗生素）混匀。
7.37℃摇床180 rpm 振荡培养60分钟使抗菌素基因表达。
8.取100μL涂盘到含有跟质粒抗菌素基因对应的抗生素的LB固体培养皿上。剩下的900μL菌液可以放4℃，等转化结果出来后再处理。如果转化菌落数过少，可以将剩下的菌液离心弃800μL上清（培养基），用剩下的100μL培养基重悬细菌后再涂盘。
9.将平板平放于37℃直至液体被吸收（一般需要10分钟）。
10.倒置培养，37℃培养12-16小时。

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