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BrdU 标记法细胞繁殖流式细胞仪检测试剂盒产品说明书

发布时间：2025/8/18 11:17:18 阅读次数：16

BrdU 标记法细胞繁殖流式细胞仪检测试剂盒产品说明书

主要用途
BrdU 标记法细胞繁殖流式细胞仪检测试剂是一种旨在使用溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU) 替代脱氧胸腺嘧啶核苷(Thymidine) 整合到合成的 DNA 链中，再运用抗 BrdU 单克隆抗体以及荧光染料缀合物二抗，通过双重参数细胞流式仪定量检测 DNA 含量、分析细胞周期和细胞繁殖水平的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。主要适用于各种活体细胞(动物、人体、植物等) 的 DNA 含量测定。广泛用于细胞繁殖，包括细胞衰老、细胞凋亡的研究。产品严格无菌，即到即用，反应敏感，操作简捷，性能稳定。

技术背景
溴脱氧尿嘧啶核苷(5－bromo－2－deoxyuridine；BrdU)是 DNA 前体胸腺嘧啶核苷类似物，通过竞争掺入 DNA 合成期(S 期)细胞单链 DNA 核苷酸序列替代胸腺嘧啶。由于组织细胞内无内源性 BrdU 存在，应用 BrdU 与胸腺嘧啶竞争掺入的强度，来分析细胞增殖状况，包括增殖细胞的种类，增殖速度等细胞动力学问题。自 82 年 Gratzer 制备出抗 BrdU 单抗及标记检测技术后，应用BrdU 标记的敏感性已与氘胸腺嘧啶核苷(3H-TdR) 相似，而成为取代同位素的非放射性标记物之一。通常使用免疫组化方法定量或定性检测其标记。反映细胞繁殖、细胞周期和 DNA 合成以及含量等。流式细胞术(FLOW CYTOMETRY)是七十年代发展起来的集计算机、激光、流体力学、细胞化学、细胞免疫学为一体的高科学技术。

产品内容
标记液(Reagent A)        微升
清理液(Reagent B)        毫升
固着液(Reagent C)        毫升
修复液(Reagent D)        毫升
变性液(Reagent E)        毫升
中和液(Reagent F)        毫升
抗体液(Reagent G)        微升
封阻液(Reagent H)        毫升
染色液(Reagent I)        微升
复染液(Reagent J)        毫升
产品说明书        1 份

保存方式
保存标记液(Reagent A)、固着液(Reagent C)、修复液(Reagent D)、抗体液(Reagent G)、封阻液(Reagent H)、染色液(Reagent I)和复染液     (Reagent J) 在－20℃冰箱里，其余的保存在 4℃冰箱里；抗体液(Reagent G)和染色液(Reagent I) 严禁反复冻融；标记液 (Reagent A)、染色液(Reagent I) 和复染液(Reagent J)，避免光照；有效保证 6 月

用户自备
胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液(G&VS12024)：用于细胞脱离
完全细胞培养液(G&VS12052)：用于中和胰蛋白酶的处理
毫升锥形离心管：用于细胞收集的操作
毫升离心管：用于细胞染色的容器
台式离心机：用于细胞收集的操作
微型台式离心机：用于细胞收集的操作
细胞流式仪：用于细胞荧光分析

实验步骤
实验开始前，将XX ℃冰箱里试剂盒中的试剂置入冰槽里融化。然后进行下列操作：
1 ．准备   个   孔细胞培养板的细胞(XX细胞/3 毫升培养液/孔)
2 ．加入   微升标记液(Reagent A)，避免光照
3 ．轻轻摇动培养板，混匀
4 ．放进XX℃细胞培养箱孵育 1 小时，避免光照
5 ．小心抽去含有标记液(Reagent A) 细胞培养液
6 ．加入XX毫升清理液(Reagent B)，铺满培养孔表面
7 ．小心抽去清理液(Reagent B)
8 ．重复实验步骤XX至XX一次
9 ．加入XX毫升用户自备的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液
10．放进XX℃细胞培养箱孵育 1 分钟
11．加入XX毫升用户自备的完全细胞培养液
12．移取细胞混匀液到XX毫升锥形离心管
13．放进台式离心机离心XX分钟，速度为XXg(或XX rpm，例如 EPPENDORF 5810R)
14．小心抽去上清液
15．加入 5 毫升清理液(Reagent B)，混匀细胞颗粒群
16．放进台式离心机离心XX分钟，速度为XXg(或XXrpm，例如 EPPENDORF 5810R)
17．小心抽去上清液
18．加入XX 微升清理液(Reagent B)，混匀细胞颗粒群
19．(选择步骤)细胞计数
20．同时准备XX个XX ℃预冷的新的 15 毫升锥形离心管
21．加入XX 毫升XX℃预冷的固着液(Reagent C)
22．用XX 微升枪头一滴一滴加入细胞悬液到含有预冷的固着液(Reagent C) 里，保持轻度涡旋震荡
23．置于冰槽里孵育XX分钟
24．放进台式离心机离心XX分钟，速度为XXg(或XXrpm，例如 EPPENDORF 5810R)
25．小心抽去上清液
26．加入XX毫升修复液(Reagent D)，上下抽吸混匀
27．转移到XX 毫升离心管
28．室温下孵育XX 分钟
29．放进微型台式离心机离心XX分钟，速度为XXg(或XX rpm，例如 EPPENDORF 5415D)
30．小心抽去上清液
31．用手指轻弹管底，使细胞颗粒松动
32．加入XX 毫升变性液(Reagent E)
33．涡旋震荡XX 秒
34．室温下孵育XX 分钟
35．放进微型台式离心机离心XX 分钟，速度为XX g(或XX rpm，例如 EPPENDORF 5415D)
36．小心抽去上清液
37．用手指轻弹管底，使细胞颗粒松动
38．加入XX 毫升中和液(Reagent F)
39．涡旋震荡XX秒
40．放进微型台式离心机离心XX 分钟，速度为XX g(或XX rpm，例如 EPPENDORF 5415D)
41．小心抽去上清液
42．用手指轻弹管底，使细胞颗粒松动
43．加入XX微升抗体液(Reagent G)，充分混匀
44．室温下孵育XX分钟
45．加入XX毫升封阻液(Reagent H)，混匀
46．放进微型台式离心机离心XX分钟，速度为XX g(或XX rpm，例如 EPPENDORF 5415D)
47．小心抽去上清液
48．用手指轻弹管底，使细胞颗粒松动
49．加入XX 微升染色液(Reagent I)，充分混匀
50．室温下孵育XX 分钟，避免光照
51．加入XX毫升封阻液(Reagent H)，混匀
52．涡旋震荡XX秒
53．放进微型台式离心机离心XX 分钟，速度为XX g(或XX rpm，例如 EPPENDORF 5415D)
54．小心抽去上清液
55．重复实验步骤 51 至 54 二次
56 ．加入XX 微升复染液(Reagent J)，用枪头充分混匀
57．移入到细胞流式仪专用测试管(可放进 4℃冰箱里待测)，避免光照
58．即刻进行细胞流式仪分析：波长XX nm 氩离子激光器，观察XX 个细胞以上
59．建立地形图或散点图以及直方图分析
    染色液(Reagent I)        复染液(Reagent J)
荧光染料    异硫氰酸荧光素(FITC)        碘化丙啶 (Propidium iodide；PI)
荧光颜色    绿色            红色
散发波长                (使用 phycoerythrin 的信号检测)
流式仪通道    FL1        FL2
作用    BrdU 的整合        DNA 含量

注意事项
1．本产品为 10 次操作量
2．在整个操作过程中须戴手套，以防污染
3．孵育时，必须避免光照
4 ．建议细胞染色完成后，即刻进行细胞流式仪分析。如果放进 4℃冰箱里待测，不要超过 3 天
5 ．细胞流式仪分析前，须混匀内容物
6 ．细胞检测量不得少于 10000 个
7 ．务必测试阳性或阴性对照组；阳性对照细胞建议使用 U937 、K562 、MOLT4 等
8 ．检测时，须弥补电子补偿，以去除双重参数的光谱重叠
9 ．告知流式仪技术员有关细胞类型
10．本公司提供细胞流式仪分析外包服务
11．本公司提供系列细胞凋亡和衰老检测试剂产品

质量标准
1 ．本产品经鉴定性能长期稳定
2 ．本产品经鉴定显色清晰

使用承诺
极威生物秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后 10 天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式(实验报告)与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒
IF IT DOESN’T WORK ， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息
编号            名称                规格
G&VS10033    BrdU 标记法细胞繁殖流式细胞仪检测试剂盒        10 次
G&VS10033A    标记液(Reagent)                 5 毫升
G&VS10033B    清理液(Reagent)                 500 毫升
G&VS10033C    固着液(Reagent)                 100 毫升
G&VS10033D    修复液(Reagent)                50 毫升
G&VS10033E     变性液(Reagent)                 50 毫升
G&VS10033F    中和液(Reagent)                 100 毫升
G&VS10033G    抗体液(Reagent)                 5 毫升
G&VS10033H    封阻液(Reagent)                 100 毫升
G&VS10033I    染色液(Reagent)                 5 毫升
G&VS10033J    复染液(Reagent)                50 毫升
产品编号            名称                规格
G&VS10021    细胞周期流式细胞分析试剂盒            100 次
G&VS10033    BrdU 标记法细胞繁殖流式细胞仪检测试剂盒        10 次
G&VS10034    BrdU 标记法细胞繁殖显微镜检测试剂盒        10 次
G&VS10012. 1    细胞衰老特异性β-半乳糖苷酶原位染色试剂盒    100/250 次
G&VS10012.2    全组织衰老特异性β-半乳糖苷酶原位染色试剂盒    10 次
G&VS10012.3    冰冻切片组织衰老特异性β-半乳糖苷酶原位染色试剂盒    50 次
G&VS80056. 1    细胞衰老特异性脂褐素原位染色试剂盒        50 次
G&VS80056.2    全组织衰老特异性脂褐素原位染色试剂盒        10 次
G&VS80056.3    冰冻切片组织衰老特异性脂褐素原位染色试剂盒    50 次
G&VS80056.4    石蜡切片组织衰老特异性脂褐素原位染色试剂盒    50 次
G&VS30072    P16 蛋白表达西方杂交分析试剂盒        5 次
G&VS30073    P21 蛋白表达西方杂交分析试剂盒        5 次
G&VS20104    P16 基因表达北方杂交分析试剂盒        5 次
G&VS20105    P21 基因表达北方杂交分析试剂盒        5 次
G&VS20106. 1    端粒酶活性 TRAP 电泳分析试剂盒        20 次
G&VS20106.2    端粒酶活性 TRAP 实时定量检测试剂盒        20 次
G&VS20107    hTERT 表达实时定量检测试剂盒            20 次
G&VS10037. 1    细胞 β-半乳糖苷酶化学发光法定量检测试剂盒    20 次
G&VS10037.2    细胞 β-半乳糖苷酶比色法定量检测试剂盒        20 次