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DNA片段磷酸化试剂盒

发布时间：2025/8/22 10:15:36 阅读次数：26

CAT#:JW-211239
低温运输，-20℃保存

DNA片段磷酸化试剂盒

产品及特点
人工合成的PCR引物、linker和adaptor的5′端一般都是羟基基团而不是磷酸基团（除非额外付费要求在人工合成时加上磷酸基团），而任何DNA连接酶都不能将一个DNA分子5′端的羟基基团和另一个DNA分子3′端的羟基基团进行连接，因此通过人工合成的DNA片段和天然DNA之间的连接效率一般都比天然DNA彼此的连接效率低（天然DNA 4个端口均可连接，人工合成的DNA跟天然DNA有2个端口可以连接，人工合成的DNA之间没有任何端口可以连接），尤其是在平末端连接时。本公司开发的DNA磷酸化产品能将DNA分子5′端的羟基基团磷酸化。它具有下列特点：
1.可以快速把DNA 5′端的羟基基团变成磷酸基团，使人工合成的DNA（包括PCR产物）跟天然DNA一样有高的连接效率。
2.既可以对单链DNA进行磷酸化处理，也可以对双链DNA片段同时磷酸化处理。
3.处理后的DNA可以直接用于连接反应、克隆等，不需要纯化。
4.本产品足够20次DNA的磷酸化实验。
5.本试剂盒只能用于科研。

规格及成分
成份                               编号            规格      包装材料
DNA磷酸化Mix              211239a    40 μL 0.5 mL红盖管
ATP溶液（10 mM）      210807   100 μL    0.5 mL白盖管
超纯水                       210806      1 mL      1.5 mL蓝盖管
使用手册                        211239sc    1份      1份
本产品采用五孔盒包装

运输及保存
低温运输，-20℃保存，有效期为一年。

自备试剂
引物、PCR产物、DNA片段

使用方法
一：双链DNA片段的磷酸化
注意：如果是PCR产物，一定要先胶回收，不能使用没经过纯化的PCR反应液，因为其中残留的大量的PCR引物会耗掉大量的激酶，降低PCR产物的磷酸化效率。
1、在1.5 mL离心管中配制下列反应液（20 μL）：
成分                                用量
PCR胶回收片段          2 μL（不超过10 pmol）
DNA磷酸化Mix         2 μL
ATP溶液（10 mM）    5 μL
加超纯水到                   20 μL
2、37℃反应30分钟。
3、70℃热处理5分钟灭活T4多核苷酸激酶。
4、可不经过纯化直接用于后续克隆，但加入量不要超过连接反应总体积的1/5。
二：单链DNA片段的磷酸化
注：单链DNA包括局部双链的DNA、引物，linker，adaptor，Oligo探针等。
5、在1.5 mL离心管中配制下列反应液（20 μL）：
成分        用量
单链DNA片段    5-10 pmol
DNA磷酸化Mix    2 μL
ATP溶液（10 mM）    1 μL
加超纯水到    20 μL
6、37℃反应30分钟。
7、70℃热处理5分钟灭活T4多核苷酸激酶。
8、可不经过纯化直接用于后续克隆，但加入量不要超过连接反应总体积的1/5。如果需要提高磷酸化DNA的浓度，可用乙醇沉淀法浓缩DNA（见附）。DNA的浓度低于5 pmol，在乙醇沉淀时还需要加入DNA助沉剂（需要另行购买）。沉淀得到的DNA可溶解在适量的水中以便得到所需的浓度。
附：乙醇沉淀浓缩DNA(本试剂盒不提供相关试剂，下列操作流程仅供参考)：
1、在DNA溶液中加入0.1倍体积的3 M乙酸钠溶液（pH 5.2），100 μL DNA溶液加10 μL乙酸钠溶液。
2、再加入2.5倍体积的无水乙醇。100 μL DNA溶液加250 μL无水乙醇。
3、混匀后12,000×g 常温离心10分钟，小心弃上清。
4、加入1 mL 70%乙醇，短暂离心3分钟后小心弃上清。
5、短暂离心5秒，吸弃残留液体（约30-50 μL）。
6、室温放置2分钟干燥后加入适量的超纯水溶解DNA，立即使用或放-20℃长期保存。

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