当前位置：首页>技术专栏
发布时间：2025/8/26 16:14:03 阅读次数：17
真菌/酵母细胞线粒体分离(活性) 试剂盒产品说明书
主要用途
真菌/酵母细胞线粒体分离(活性)试剂是一种旨在使用生物、化学和物理方法相结合， 有效去 除真菌/酵母菌细胞壁， 进一步快速且充分裂解真菌/酵母菌细胞， 从而分离出完整而纯化的活性线粒体细胞 器的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。适合于各种新鲜培养或 冻存的野生型或突变型真菌/酵母菌菌株细胞的活性线粒体的制备。其制备物产量高， 活性保证， 可以被用 于线粒体酶活性、细胞凋亡、信号传递、代谢和蛋白组学等的研究。产品不含污染性蛋白水解酶和核酶， 即到即用，性能稳定，分离产量和纯度堪称同类产品最佳。
技术背景
线粒体细胞器的分离是现代细胞生物学研究的最常用的手段之一。从任何组织或细胞分离线粒体的技术方 法基本上采用：第一，通过机械或化学方法破裂细胞；第二，通过低速差速离心去除残渣碎屑和巨大细胞 器；第三，通过高速差速离心获得线粒体；甚至，第四，可以通过等密度离心获得纯度更高的线粒体。
产品内容
清理液(Reagent A) 毫升
平衡液(Reagent B) 毫升
酶解液(Reagent C) 微升
裂解液(Reagent D) 毫升
净化液(Reagent E) 毫升
强化液(Reagent F) 毫升
保存液(Reagent G) 毫升
活性液(Reagent H) 微升
产品说明书 1 份
保存方式
保存 酶解液(Reagent C)、净化液(Reagent E)和 活性液(Reagent H)在 －20℃冰箱里，其余的保存在 4℃冰箱里，严格避免污染，有效保证 6 月
用户自备
15 毫升锥形离心管：用于线粒体初步制备物的存放
50 毫升锥形离心管：用于细胞收集后离心或清洗
1.5 毫升离心管：用于保存线粒体
4℃台式离心机：用于沉淀细胞
4℃超速离心机：用于分离细胞器成分
恒温水槽：用于孵育反应物
DOUNCE 匀浆器：用于裂解细胞
实验步骤
实验开始前，将试剂盒里的 净化液(Reagent E) 和 活性液(Reagent H) 冻融，然后移出 xx 微升 活性液(Reagent H)和1毫升 净化液(Reagent E)到xx毫升的裂解液(Reagent D) 里，混匀后，置入冰槽里，标记为 裂解工作液。然后进行下列操作。
1． 准备好 50 毫升新鲜真菌/酵母菌样品
2． 在分光光度仪上测OD600＝1.0(1 OD＝1 X 107细胞/毫升；总量为 5 X 108细胞)
3． 转移到预冷的 50 毫升锥形离心管
4． 放进 4℃台式离心机离心 10 分钟，速度为 3000g
5． 小心抽去上清液
6． 加入 xx 毫升 清理液(Reagent A)，混匀
7． 放进 4℃台式离心机离心 10 分钟，速度为 3000g
8． 小心抽去上清液
9． 加入 xx 毫升 平衡液(Reagent B)，混匀
10．放进 4℃台式离心机离心 10 分钟，速度为 3000g
11．小心抽去上清液
12．加入 xx 毫升 平衡液(Reagent B)，混匀
13．加入 xx 微升 酶解液(Reagent C)，混匀
14．放进 30℃恒温水槽孵育 60 分钟，期间每隔 15 分钟轻轻用手摇匀
15．加入 5 毫升 平衡液(Reagent B)，混匀
16．放进 4℃台式离心机离心 10 分钟，速度为 3000g
17．小心抽去上清液
18．加入 xx 毫升 平衡液(Reagent B)，混匀
19．放进 30℃恒温水槽孵育 30 分钟，继续实验步骤 21
20．同时将 平衡液(Reagent B) 置入冰槽里预冷 30 分钟(注意： 以下步骤在4℃环境下进行)
21．放进 4℃台式离心机离心 10 分钟，速度为 3000g
22．小心抽去上清液
23．加入 xx 毫升预冷的 平衡液(Reagent B)，混匀
24．放进 4℃台式离心机离心 10 分钟，速度为 3000g
25．小心抽去上清液
26．加入 xx 毫升含有 裂解液(Reagent D)、净化液(Reagent E) 和 活性液(Reagent H) 的 裂解工作液
27．涡旋震荡 5 秒，充分混匀细胞颗粒群
28．选择下列其中一种方法：
方法一：物理处理法
1． 即刻放进预冷的 DOUNCE 匀浆器
2． 在冰槽里用研磨棒匀化细胞(约 80 下)(注意： 参见注意事项 10)
3． 将所有细胞匀浆物移入 15 毫升锥形离心管
4． 放进 4℃台式离心机离心 10 分钟，速度为 1500g
5． 小心移出上清液到另一个新的预冷的 15 毫升锥形离心管——此步骤去除细胞核和未溶解的细胞
6． 放进 4℃台式高速离心机离心 10 分钟，速度为 10000g
7． 小心抽去上清液，保留沉淀颗粒——此步骤获得线粒体沉淀物
8． (选择步骤)加入 xx 毫升预冷的 保存液(Reagent G)
9． (选择步骤)放进 4℃台式高速离心机再次离心 5 分钟， 速度为 10000g
10．(选择步骤)小心抽去上清液
11．加入 xx 毫升 保存液(Reagent G)，充分混匀
12．即刻移入 1.5 毫升离心管，放进－70℃冰箱里
方法二：化学处理法
1． 在冰槽里孵育 2 分钟，期间涡旋震荡 5 秒一次
2． 加入 xx 微升预冷的 强化液(Reagent F)
3． 涡旋震荡 5 秒，充分混匀
4． 在冰槽里孵育 5 分钟，期间涡旋震荡 5 秒二次(注意： 参见注意事项 11)
5． 加入 xx 毫升预冷的 保存液(Reagent G)，轻轻摇动试管混匀
6． 放进 4℃台式离心机离心 10 分钟，速度为 1500g
7． 小心移出上清液到另一个新的预冷的 15 毫升锥形离心管——此步骤去除细胞核和未溶解的细胞
8． 放进 4℃台式高速离心机离心 10 分钟，速度为 10000g
9． 小心抽去上清液，保留沉淀颗粒——此步骤获得线粒体沉淀物
10．(选择步骤)加入 xx 毫升预冷的 保存液(Reagent G)
11．(选择步骤)放进 4℃台式高速离心机再次离心 5 分钟， 速度为 10000g
12．(选择步骤)小心抽去上清液
13．加入 xx 毫升 保存液(Reagent G)，充分混匀
14．即刻移入 1.5 毫升离心管，放进－70℃冰箱里
注意事项
1． 本产品为 10 次操作(50 毫升菌液：1 克细胞湿重或 5 X 108细胞)
2． 其它实际操作的细胞量与试剂使用量按比例调整： 例如 10 毫升菌液(OD600=1)：试剂用量是标准用量 的五分之一
3． 操作时，须戴手套
4． 整个操作须无菌操作，严格避免污染母液
5． 50 毫升(OD600＝1)菌液湿重约 1 克
6． 细胞生长条件影响线粒体的质量：建议在有氧条件下富含葡萄糖的培养基培养
7． 实验步骤 20 以下的所有操作均须在 4℃或以下状态下进行
8． 建议使用足够的细胞量
9． 建议严格控制操作时间
10．通常匀化次数为 80 下达到 80％的细胞裂解为理想状态，但不同菌株的细胞会存在差异。用户可以通 过显微镜观察 3 微升匀浆物的细胞裂解程度： 完整细胞呈现发亮的圆环。低于 50％可以增加匀化次数
11．通常孵育 5 分钟达到 80％的细胞裂解为理想状态， 但不同菌株的细胞会存在差异。用户可以通过显微 镜观察 3 微升裂解物的细胞裂解程度： 完整细胞呈现发亮的圆环。低于 50％可以增加孵育时间和涡旋 震荡次数
12．通常 1 克细胞湿重或 5 X 108细胞的线粒体含量为 50 微克线粒体蛋白，但不同菌株或培养条件会存在 差异；建议使用GENMED纯化线粒体蛋白质浓度定量测定试剂盒(G&VS10059)测定线粒体蛋白浓度
13．如果需要计量线粒体，稀释后数分钟内完成，否则线粒体将分解
14．本产品所获得的线粒体纯度和产量最为理想
15．制备产物如果放在－70℃冰箱里储存备用，严格避免反复冻融
16．如果需要获得95％以上纯度的线粒体，使用GENMED真菌/酵母细胞线粒体分离(高纯)试剂盒 (G&VS10049.3)
17 ．线粒体正常活性测定方法是： CITRATE SYNTHASE 活性、氧化磷酸化、细胞色素吸收峰谱等
18 ．线粒体内外膜完整性测定方法是： CYTOCHROME C OXIDASE 活性和荧光 JC 染色
19 ．本公司提供线粒体套餐： ROS 、NAO 、MitoTRACK、JGB、线粒体溶解等
20．本公司提供系列真菌/酵母细胞线粒体试剂产品
质量标准
1 ． 本产品经鉴定性能长期稳定
2 ． 本产品经鉴定分离的线粒体内外膜完整
3 ． 本产品经鉴定分离的线粒体维持正常活性
4 ． 本产品经鉴定不含污染性蛋白酶和核酶
使用承诺
极威生物秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货 后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定， 保证说明书所述的使用效果。在货到后 10 天内若发现确属本产品的质量问题， 请立即以书面形式(实验报 告)与本公司联系， 并将该产品退回， 经检验确系产品质量所致， 本公司负责更换产品。如系使用者错误 操作所致，本公司不承担由此造成的损失。
友情提醒
IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。
订购信息
编号 名称 规格
G&VS10049.1 真菌/酵母细胞线粒体分离(粗提)试剂盒 10 次
G&VS10049.2 真菌/酵母细胞线粒体分离(活性)试剂盒 10 次
G&VS10049.3 真菌/酵母细胞线粒体分离(高纯)试剂盒 10 次
G&VS10049.2A 清理液(Reagent A) 500 毫升
G&VS10049.2B 平衡液(Reagent B) 500 毫升
G&VS10049.2C 酶解液(Reagent C) 5 毫升
G&VS10049.2D 裂解液(Reagent D) 100 毫升
G&VS10049.2E 净化液(Reagent E) 100 微升
G&VS10049.2F GENEMD 强化液(Reagent F) 50 毫升
G&VS10049.2G 保存液(Reagent G) 100 毫升
G&VS10049.2H 活性液(Reagent H) 1 毫升
G&VS10059 纯化线粒体蛋白质浓度定量测定试剂盒 20 次
G&VS30034.1 纯化线粒体可溶性总蛋白制备试剂盒 20 次
产品编号 名称 规格
G&VS10013.1 纯化线粒体内膜功能/膜电位测定试剂盒 100 次
G&VS10013.2 活体细胞线粒体内膜功能/膜电位测定试剂盒 20 次
G&VS10014.1 线粒体外膜功能检测试剂盒 20 次
G&VS10014.2 纯化线粒体细胞色素 C 氧化酶活性测定试剂盒 20 次
G&VS10014.5 真菌/酵母细胞色素 C 氧化酶活性测定试剂盒 20 次
G&VS10015 线粒体功能詹纳斯绿 B (JGB)染色试剂盒 20 次
G&VS10016.1 细胞内氧化应激活性氧(ROS)高质荧光测定试剂盒 20 次
G&VS10016.2 细胞内氧化应激活性氧(ROS)初级荧光测定试剂盒 100 次
G&VS10016.3 活体组织氧化应激活性氧(ROS)高质荧光测定试剂盒 8/20 次
G&VS10016.4 活体组织氧化应激活性氧(ROS)初级荧光测定试剂盒 40/100 次
G&VS10016.5 冰冻切片氧化应激活性氧(ROS)高质荧光测定试剂盒 50 次
G&VS10016.6 冰冻切片氧化应激活性氧(ROS)初级荧光测定试剂盒 50 次
G&VS10067 细胞内氧化应激活性氧(ROS)比色法定量检测试剂盒 100 次
G&VS10074.1 细胞内氧化应激活性氧(ROS)红色荧光定性检测试剂盒 20 次
G&VS10074.2 细胞内氧化应激活性氧(ROS)红色荧光定量检测试剂盒 20 次
G&VS10017.1 活体细胞线粒体损伤/氧化(NAO)荧光测定试剂盒 20/200 次
G&VS10017.2 纯化线粒体损伤/氧化(NAO)荧光测定试剂盒 20/200 次
G&VS10018 纯化线粒体溶解试剂盒 20 次
G&VS10019 线粒体形态染色试剂盒 100 次
G&VS10020.1 活体细胞线粒体跟踪试剂盒 100 次
G&VS10020.2 活体细胞线粒体长期跟踪试剂盒 20 次
G&VS20023.1 纯化线粒体 DNA 萃取试剂盒 20 次
G&VS20023.6 真菌/酵母细胞线粒体 DNA 萃取试剂盒 10/20 次
G&VS10049.1 真菌/酵母细胞线粒体分离(粗提)试剂盒 10 次
G&VS10049.2 真菌/酵母细胞线粒体分离(活性)试剂盒 10 次
G&VS10049.3 真菌/酵母细胞线粒体分离(高纯)试剂盒 10 次
G&VS10050 细胞 ATP 定量检测试剂盒 20 次
G&VS10059 纯化线粒体蛋白质浓度定量测定试剂盒 20 次
G&VS50001 超氧化物歧化酶(SOD)活性检测试剂盒 50 次
G&VS50003.2 线粒体超氧化物歧化酶(Mn/Fe SOD)分离试剂盒 50 次
G&VS50004 超氧化物歧化酶(SOD)标准曲线测定试剂盒 5 次
G&VS30034.1 纯化线粒体可溶性总蛋白制备试剂盒 20 次
G&VS30034.3 真菌/酵母细胞线粒体可溶性总蛋白制备试剂盒 20 次
G&VS50005 NADH 活性定量检测试剂盒 20/80 次
G&VS50006 乳酸脱氢酶(LDH)总活性定量检测试剂盒 20/80 次
G&VS10065 线粒体膜通道孔(MPTP)检测试剂盒 20 次
G&VS12198 纯化线粒体冻存液 50 毫升
G&VS50067 NADPH 活性定量检测试剂盒 20/80 次
上海极威生物科技有限公司 公司地址:上海市崇明县长兴镇潘园公路1800号2号楼9703室
邮箱：435399850@qq.com 电话：021-80186165 手机：16602115336
备案号：沪ICP备15046135号-4
