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4×LAMP MasterMix（电泳法）

发布时间：2025/8/26 16:59:08 阅读次数：24

CAT#:JW-211220-50
低温运输，-20℃保存

4×LAMP MasterMix（电泳法）

产品及特点
4×LAMP MasterMix含有LAMP扩增所需的所有成分，可以用于LAMP等温扩增。LAMP即Reverse Transcription Loop-Mediated Isothermal Amplification（逆转录-环介导等温扩增），它利用4条模板专一的特异引物、逆转录酶和具有链置换能力的Bst DNA 聚合酶2.0(8U/uL)，在等温条件下(65℃左右) 30－60分钟完成逆转录和LAMP扩增。该技术在灵敏度、特异性和检测范围等指标上能媲美甚至优于定性PCR技术，同时还不需要昂贵的仪器设备。目前已成功应用于生物的快速检测，广泛用于各个领域。本试剂盒具有下列特点：
1.即开即用，含有红色电泳示踪剂，扩增后可以直接上样，不需要上样液。
2.4×浓度，提供更多的加样品的空间，可以增加检测机率。
3.高特异性，精心优化的配方，非特异扩增比自配的试剂更低。
4.高扩增效率，一般比PCR灵敏一个数量级。
5.65℃左右等温扩增，不需要贵重仪器。
6.本试剂盒足够50次20uL体系的LAMP扩增。
7.提供扩增对照，便于在遇到困难时分析原因。
8.本产品只能用于科研，不能用于临床。

规格及成分
成份                                           编号           规格    包装材料
4×LAMP MasterMix
（含电泳示踪剂，待加酶）     211220a      200uL    0.5mL白盖管
Bst DNA聚合酶2.0(8U/uL)    11-220319   50uL    0.5mL红盖管
阳性对照模板-引物混合物      210801            50uL    0.5mL蓝盖管
使用手册                         211220sc   1份            无

运输及保存
低温运输，-20℃保存，有效期一年。

自备试剂
DNA模板、LAMP引物

使用方法
1.制备模板DNA：用于选用合适的方法制备模板DNA。如果有N个样品，最好设置N+2个样品制备，多出的两个一个是样品制备阳性对照，一个是样品制备阴性对照。
2.配制5×LAMP引物混合液
先加超纯水将合成的HPLC级别的下列引物干粉稀释到下表所标注的母液浓度，然后在一新的离心管中按表中所列体积加入各种引物母液和超纯水，最后得到1mL的5×LAMP引物混合液，此混合液足够250次20uL体系的LAMP扩增。如果需要配制的5×LAMP引物混合液体积异于1mL，则各成分的用量请按比例调整。引物混合液可以在-20℃放置2年。
引物名称    母液浓度    加母液量    在5×LAMP引物混合液中的浓度
FIP引物    100 uM           80 uL           8 uM
BIP引物    100 uM         80 uL           8 uM
F3引物    100 uM          10 uL          1 uM
B3引物    100 uM            10 uL          1 uM
Loop F    100 uM            20 uL           2 uM
Loop B    100 uM          20 uL            2 uM
超纯水                          780 uL
终体积                          1mL
注：如果没有Loop引物，则用超纯水补足其体积。
3.在冰上融化4×LAMP MasterMix（待加酶），混匀，稍离心。第一次使用时，请将50uL Bst DNA聚合酶2.0(8U/uL)全部加入到4×LAMP MasterMix中并轻柔混匀至少1分钟，然后再使用。如果有N个样品，则在N+2个反应管中加入以下组份，多出的一管是LAMP扩增阳性对照（PC），一管是LAMP扩增阴性对照（NC）：
成份            N+2个样品管    LAMP扩增PC    LAMP扩增NC
4×LAMP MasterMix
（加酶后）        5 uL        5uL        5 uL
自备的5×LAMP引物
混合液            4 uL         不加        4 uL
阳性对照模板-引物混合物    不加        4 uL        不加
自备模板DNA        1-9 uL        不加        不加
补自备超纯水到        20 uL        20 uL        20 uL
4.混匀，置于65℃保温60分钟。如果是在PCR仪中保温，必须加热盖。如果用金属浴或水浴保温，没有热盖，必须覆盖50uL的自备石蜡油，否则保温期间反应体系的水分会蒸发，会严重影响反应效率。
5.扩增结束后取5-10uL扩增产物直接上样（本产品含有红色电泳示踪剂，不需要再加上样液，红色示踪剂的泳动速度相当于50bp的DNA）进行2-3%的琼脂糖凝胶电泳，有LAMP扩增的样品将可见LAMP特征性DNA梯度电泳图谱（见下图）：

6.结果分析：如果本试剂盒提供的阳性对照-引物混合物能够扩增而阴性对照不能扩出，则实验有效。如果阳性对照-引物混合物没有扩增出条带，则试剂盒的问题，请跟厂家联系。如果阴性对照（水作为模板）有扩增出条带，则说明LAMP样品或试剂有过去的扩增产物的污染，需要注意操作的规范性，如果不能解决，可以重新设计LAMP引物扩增新的靶片段。

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