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发布时间：2025/8/28 15:49:40 阅读次数：12
CAT#:JW-220134
低温运输，-20℃保存
RNA加Cap0和Cap1试剂盒
产品及特点
真核生物mRNA 5’端的帽结构为mRNA的稳定、转运和翻译所需，但体外转录制备得到的RNA并没有帽结构。为了提高这些RNA在体外翻译、转染和微注射应用的稳定性，很有必要为其加上Cap0帽结构（m7GpppN帽结构或m7G帽结构）。虽然Cap0 RNA可以细胞内被有效的翻译成蛋白质，但在体内（而不是细胞内）使用时会引起免疫反应，而Cap1 RNA可以逃逸免疫反应。因此很多时候需要制备Cap1 RNA。Cap1帽结构由Cap0帽结构甲基化而得。本产品是专门用于为无帽RNA分子加上Cap1帽结构的试剂盒。此加帽过程由RNA triphosphatase, guanylyltransferase、guanine methyltransferase、m7GpppN甲基化酶四个酶催化的连贯反应组成，其示意图如下：
本产品具有下列特点：
1.即开即用，用户只需提供无帽RNA即可。
2.加帽效率高，接近9%。
3.本试剂盒足够40次20μL体系的无帽RNA加Cap0-Cap1帽反应，每次可以处理多达10μg的无帽RNA。
4.本试剂盒也可以用于无帽RNA加Cap0，只是在设置反应时不加RNA Cap0甲基化酶。
5.所得Cap1 RNA经过纯化后可以直接用于后续实验。也可以不经过纯化用于polyA加尾反应。
6.本产品只能用于科研。
规格及成分
成份 编号 规格 包装
RNA加Cap0反应液A 221225a 80 μL 0.5mL绿盖管
RNA加Cap0反应液B 221225b 40 μL 0.5mL黄盖管
RNA加Cap0反应液C 221225c 40 μL 0.5mL蓝盖管
RNA加Cap0酶，10U/μL 221225c 40 μL 0.5mL红盖管
RNA Cap0甲基化酶，50U/μL 220134a 40 μL 0.5mL红盖管
使用手册 220134sc 1份 无
本产品使用五孔盒包装
运输及保存
低温运输，-20℃保存、有效期一年。
自备试剂
超纯水、体外转录试剂盒，RNA纯化试剂盒
操作流程
一、体外转录制备RNA模板（本试剂盒不含所需试剂）
1.用自备的体外转录剂盒制备RNA模板。
2.纯化RNA并测定其浓度。纯化的RNA需要溶解在RNase-free水中。
二、加帽反应
3.在一个RNase-free离心管中，加入10μg的纯化的无帽RNA，补RNase-free水到14μL。
4.65℃变性10分钟后，放冰上待用。变性能打开可能空间阻碍酶接触RNA末端的二级结构，非常重要。如果加帽效果不好，还可以提高温度到75℃和85℃变性10分钟。
5.再在另外一个RNase-free离心管中加入下列成分：
成分 加入量
RNA加Cap0反应液A 2 μL
RNA加Cap0反应液B 1 μL
RNA加Cap0反应液C 1 μL
RNA加Cap0酶，10U/μL 1 μL
RNA Cap0甲基化酶，40U/μL 1 μL
6.最后将冰上放置的14μL无帽RNA加入并轻柔吹打混匀。
7.37℃保温2小时。
8.得到的Cap1 RNA可以不经过纯化直接用于polyA加尾。也可以纯化后用于各种后续实验。如果在设置反应时不加RNA Cap0甲基化酶，则得到的RNA是Cap0 RNA。
关联产品
RNA加Cap0试剂盒，天净沙T7体外转录试剂盒
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