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细胞总抗氧化能力化学发光定量检测试剂盒产品说明书

发布时间：2025/8/28 17:43:48 阅读次数：2

细胞总抗氧化能力化学发光定量检测试剂盒产品说明书

主要用途
细胞总抗氧化能力(TAC) 化学发光定量检测试剂是一种旨在通过自由基引发剂的参与，使发光物氧化降解并发光，在化学发光仪(Luminometer) 的帮助下定量检测对应于标准水溶性生育酚 Trolox 的总抗氧化能力，即抑制/诱导时间或等值浓度的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。适用于各种新鲜细胞的总抗氧化能力检测。可以被用于细胞凋亡、衰老、代谢和营养学等的研究。产品严格无菌，即到即用，操作简易，性能稳定。

技术背景
超氧自由基阴离子(superoxide radical；O2- )、过氧化氢(hydrogen peroxide；H2O2)、羟自由基(hydroxyl radical)、单线态氧气(singlet oxygen) 等细胞内活性氧族(Reactive Oxygen Species；ROS) 的产生和增多，将导致细胞衰老或凋亡，甚而导致诸如冠心病、风湿性关节炎、肿瘤、退行性病变等各种病理状况。在生物系统内，通过抗氧化酶例如超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶等，和抗氧化因子，例如生育醇、类胡萝卜素和抗坏血酸等所产生的抗氧化能力，即捕获自由基的能力。通过偶氮二异丁基脒二盐酸盐(2,2'-azobis(2-amidinopropane) dihydrochloride；AAPH) 产生的脂质过氧化自由基(peroxyl radicals)，衡量体系中抗氧化剂的捕获自由基、消耗抗氧化剂能力，在发光仪的帮助下，观察消耗时间，并与标准化抗氧化剂水溶性生育酚Trolox对照。

产品内容
清理液(Reagent A)     毫升
低渗液(Reagent B)    毫升
缓冲液(Reagent C)    毫升
发光液(Reagent D)    微升
引发液(Reagent E)    毫升
标准液(Reagent F)    微升
产品说明书    1 份

保存方式
保存发光液(Reagent D)、引发液(Reagent E)和标准液(Reagent F)在－20℃冰箱里，严格避免光照；其余的保存在 4℃冰箱里，有效保证 3 月

用户自备
细胞刮脱棒：用于收集细胞
15 毫升锥形离心管：用于细胞操作的容器
2 毫升离心管：用于细胞操作的容器
1.5 毫升离心管：用于细胞裂解悬液存放的容器
4℃台式离心机：用于沉淀细胞
4℃微型台式离心机：用于沉淀细胞和澄清细胞悬液
超声仪：用于破碎细胞
96 孔板：用于检测用的样品孔板
化学发光仪：用于检测化学发光

实验步骤
一、细胞裂解悬液制备
1．准备至少 2 瓶 75cm2 细胞培养瓶的新鲜待测细胞
2．小心抽去细胞培养液
3．使用细胞刮脱棒刮脱细胞
4．移入到 15 毫升锥形离心管
5．放进 4℃台式离心机离心 10 分钟，速度为 300g
6．小心抽去上清液
7．加入XX毫升 4℃预冷的清理液(Reagent A)，混匀细胞
8．转移到 4℃预冷的 2 毫升离心管
9．放进 4℃微型台式离心机离心 10 分钟，速度为 400g(或 2000RPM，例如 eppendorf 5415)
10．小心抽去上清液
11．加入XX毫升 4℃预冷的清理液(Reagent A)，混匀细胞
12．放进 4℃微型台式离心机离心 10 分钟，速度为 400g(或 2000RPM，例如 eppendorf 5415)
13．小心抽去上清液
14．重复实验步骤 11 至 13 二次
15．加入XX微升低渗液(Reagent B)，混匀细胞
16．置于 200 瓦超声仪枪头下，离心管在冰槽里
17．超声功率为 100％，猝击 10 秒，1 个循环
18．放进 4℃微型台式离心机离心 10 分钟，速度为 10000g(或 10000RPM，例如 eppendorf 5415)
19．移取上清液到新的 4℃预冷的 1.5 毫升离心管
20．进行蛋白定量检测(建议使用 Bradford 蛋白质浓度定量试剂盒－G&VS30030. 1)
21．使用清理液(Reagent A) 调整蛋白浓度为XX微升
22．置于冰槽里待测

二、样品测定
根据实际要求，选择下列任一方法进行检测。
方法一：时间－抑制曲线
测读开始前，打开化学发光仪，放进空置待用的 96 孔板，设定仪器内温度为 37℃预热和运行程序(包括清洗步骤)：延时 1 秒，整合测读 1 秒，每隔 30 秒测读一次，持续 10 分钟；然后关掉实验室的灯光。将-20
℃冰箱里的试剂置入冰槽里融化，避免光照。移出XX毫升缓冲液(Reagent C) 到新的 1.5 毫
升离心管，加入XX微升发光液(Reagent D) 和 20 微升引发液(Reagent E)，混
匀后，标记为工作液，严格置于暗室里，即刻(5 分钟内)进行下列操作。
1．准备 1 个 96 孔板，做好标记：空白对照孔、标准对照孔、样品孔
2．分别移取XX微升工作液到 96 孔板里的每个孔里，避光操作
3．加入XX微升缓冲液(Reagent C) 到空白对照孔里
4．加入XX微升标准液(Reagent F) 到标准对照孔里
5．加入 10 微升细胞裂解样品到样品孔里
6．轻轻摇动 96 孔板，使其混匀
7．放进 37℃培养箱里孵育 1 分钟，避免光照
8．即刻放进 37℃化学发光仪里测读：延时 1 秒，测读 1 秒，每隔 2 分钟测读一次，测读 20 分钟
9．分析结果： (可以选择任一时间点读数分析)
(1) 空白对照孔为最大相对发光单位(RELATIVELIGHT UNIT；RLU)读数：标记 M
(2) 标准对照孔在 0 秒为最大浓度抗氧化实际相对发光单位(RLU)读数： S0
(3) 样品孔在 0 秒为样品最大抗氧化实际相对发光单位(RLU)读数： B0
(4) 标准对照孔在 20 分种时抗氧化实际相对发光单位(RLU)读数： S20
(5) 样品孔在 20 分钟时样品抗氧化实际相对发光单位(RLU)读数： B20
(6) 分别计算标准样品和待测样品在 20 分钟抑制时间(INHIBITION TIME)或诱导时间 (INDUCTION TIME)的百分比：

10．计算样品总抗氧化能力(微摩尔 TROLOX 等值)：

方法二：终点－抑制曲线
测读开始前，打开化学发光仪，放进空置待用的 96 孔板，设定仪器内温度为 37℃预热和运行程序(包括清洗步骤)：延时 1 秒，整合测读 1 秒；然后关掉实验室的灯光。将-20℃冰箱里的试剂置入冰槽里融化，
避免光照。移出XX毫升缓冲液 (Reagent C) 到新的 1.5 毫升离心管，加入XX微升
发光液(Reagent D) 和XX微升引发液(Reagent E)，混匀后，标记为工作液，严
格置于暗室里，即刻(5 分钟内)进行下列操作。

(一) 标准样品准备
1．准备好 5 个 1.5 毫升离心管，标记为 1 至 5 号管
2．分别加入XX微升缓冲液(Reagent C) 到 2 至 5 号管
3 ．移取XX微升标准液(Reagent F) 到 1 号管，混匀
4 ．小心移取XX微升 1 号管的标准液(Reagent F) 到 2 号管，混匀
5 ．小心移取XX微升 2 号管稀释的标准液(Reagent F) 到 3 号管，混匀
6．小心移取XX微升 3 号管稀释的标准液(Reagent F) 到 4 号管，混匀
7．将 1 至 5 号管放进冰槽里备用，避免光照；标准管浓度见下表
管号    缓冲液(Reagent C)    标准液(Reagent F)    标准 Trolox 浓度
1    微升        微升        1000 纳摩尔
2    微升        微升 1 号管    500 纳摩尔
3    微升        微升 2 号管    250 纳摩尔
4    微升    微升 3 号管    125 纳摩尔
5    微升    0    0

(二) 样品测定
1．准备 1 个 96 孔板，做好标记：空白对照孔、标准对照孔、样品孔
2．分别移取XX微升工作液到 96 孔板里的每个孔里，避光操作
3．加入XX微升缓冲液(Reagent C) 到空白对照孔里
4．加入XX微升上述配制的 5 个标准液(Reagent F) 到 5 个标准对照孔里
5．加入 10 微升细胞裂解样品到样品孔里
6．轻轻摇动 96 孔板，使其混匀
7．放进 37℃培养箱里孵育 1 分钟，避免光照
8．即刻放进 37℃化学发光仪里测读：延时 1 秒，测读 1 秒
9．分析结果：
(1)构建标准曲线：纵座标(Y 轴)为相对发光单位(RLU)；横座标(X 轴)为标准 Trolox 浓度(纳摩尔)
(2)空白对照孔为最大 RLU 读数
(3)标准对照孔和样品孔为实际 RLU 读数
(4)计算样品实际总抗氧化能力
(5)根据下列公式计算样品总抗氧化能力(抑制百分率)

注意事项
1．本产品为 50 次操作
2．操作时，须戴手套
3．建议使用细胞刮脱棒收集细胞，而不是胰蛋白酶处理
4．细胞裂解悬液制备的所有操作均须在 4℃状态下进行
5．测读的所有步骤均须在暗室里进行
6．测试前，细胞须处于新鲜培养的
7．细胞裂解悬液制备后即刻测读，不宜过夜保存
8．细胞裂解悬液须清澈
9．样本量不宜超过 20 微升
10．如果样品抑制或诱导时间小于 30 秒，建议稀释样品或增加 10％RLU 比值到 20％至 50％，但最大不得超过 50％
11．根据用户需求，调整工作液的配制用量
12．工作液具有光高度敏感性，因此整个操作须避光进行
13．如果测试样品很多，建议使用排枪移液
14．如果是注射式化学发光仪，建议测试前后使用无离子水冲洗化学发光仪注射(injector)管道
15．如果用户没有冷光仪，可以使用闪烁探测器(scintillation counter 或β计数器)替代，但敏感性较低
16．如果需要强化效果，可以整合检测至 10 秒
17．建议待测样本的蛋白浓度为 100 微克/10 微升(本公司提供 Bradford 蛋白质浓度定量试剂盒 G&VS30030. 1)
18．本公司提供系列抗氧化分析试剂产品

质量标准
1 ．本产品经鉴定性能稳定
2 ．本产品经鉴定检测敏感

使用承诺
极威生物秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后 10 天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式(实验报告)与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒
IF IT DOESN’T WORK ， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息
编号        名称                规格
G&VS10053. 1    细胞总抗氧化能力化学发光定量检测试剂盒    50 次
G&VS10053. 1A    清理液(Reagent A)            500 毫升
G&VS10053. 1B    低渗液(Reagent B)            100 毫升
G&VS10053. 1C    缓冲液(Reagent C)            100 毫升
G&VS10053. 1D    发光液(Reagent D)            1 毫升
G&VS10053. 1E    引发液(Reagent E)            10 毫升
G&VS10053. 1F    标准液(Reagent F)            10 毫升
G&VS30030. 1    Bradford 蛋白质浓度定量试剂盒        100 次
产品编号        名称                    规格
G&VS10053. 1    细胞总抗氧化能力(TAC)化学发光法定量检测试剂盒    50 次
G&VS10053.2    组织总抗氧化能力(TAC)化学发光法定量检测试剂盒    50 次
G&VS10053.3    食物总抗氧化能力(TAC)化学发光法定量检测试剂盒    50 次
G&VS10053.4    体液总抗氧化能力(TAC)化学发光法定量检测试剂盒    50 次
G&VS10114. 1    细胞总抗氧化能力(TAC)比色法(ABTS)定量检测试剂盒    50 次
G&VS10114.2    组织总抗氧化能力(TAC)比色法(ABTS)定量检测试剂盒    50 次
G&VS10114.3    食物总抗氧化能力(TAC)比色法(ABTS)定量检测试剂盒    50 次
G&VS10114.4    体液总抗氧化能力(TAC)比色法(ABTS)定量检测试剂盒    50 次
G&VS10131. 1    细胞总抗氧化能力(TAC)比色法(DDPH)定量检测试剂盒    50 次
G&VS10131.2    组织总抗氧化能力(TAC)比色法(DDPH)定量检测试剂盒    50 次
G&VS10131.3    食物总抗氧化能力(TAC)比色法(DDPH)定量检测试剂盒    50 次
G&VS10131.4    体液总抗氧化能力(TAC)比色法(DDPH)定量检测试剂盒    50 次