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动物组织活性肌质网分离试剂盒产品说明书

发布时间：2025/8/29 15:00:46 阅读次数：1

动物组织活性肌质网分离试剂盒产品说明书

主要用途
动物组织活性肌质网分离试剂是一种旨在从动物肌肉组织中分离出完整而纯化的活性肌质网细胞器组分的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适合于各种动物肌肉组织（人体、老鼠、兔子等的心脏、骨骼肌）的活性肌质网的制备。可以被用于蛋白活性、肌肉收缩机制、信号传递、钙离子通道、蛋白组学和细胞生理学等的研究。产品不含污染性蛋白酶和核酶，即到即用，性能稳定，分离产量和纯度堪称同类产品最佳。

技术背景
肌质网（sarcoplasmic reticulum；SR）细胞器组分是由两种特征性的膜结构系统组成：来自于内质网的纵小池（longitudinal cisternae）和包括三连体（triad）、肌纤维膜管性内褶形成的横小管（T tubules）。肌质网的分离是现代细胞生物学研究的常用手段之一：第一，通过机械或化学方法破裂组织细胞；第二，通过低速差速离心去除残渣碎屑和巨大细胞器；第三，通过高速差速离心获得肌质网；甚至，第四，可以通过等密度离心获得纯度更高的肌质网。

产品内容
清理液（Reagent A）        毫升
酶解液（Reagent B）        毫升
裂解液（Reagent C）        毫升
净化液（Reagent D）    毫升
活性液（Reagent E）        微升
强化液（Reagent F）        毫升
稳定液（Reagent G）    毫升
保存液（Reagent H）    毫升
产品说明书        1份
保存方式
保存酶解液（Reagent B）、净化液（Reagent D）和活性液（Reagent E）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里；有效保证6月

用户自备
15毫升锥形离心管：用于肌质网初步制备物的存放
50毫升锥形离心管：用于组织收集后离心或清洗
1.5毫升离心管：用于保存肌质网
4℃台式离心机：用于沉淀组织
4℃超速离心机：用于分离细胞器成分
DOUNCE匀浆器：用于裂解组织

实验步骤
一、组织匀浆法
实验开始前，将试剂盒里的净化液（Reagent D）和活性液（Reagent E）冻融，然后移取xx微升活性液（Reagent E）、 xx毫升净化液（Reagent D）和4毫升的裂解液（Reagent C）到15毫升锥形离心管里，混匀后，置入冰槽里，标记为裂解工作液。然后进行下列操作。
1．手术取出动物组织，避免或去除脂肪组织，秤重以确定1克组织重量（实验前最好使动物空腹12至24小时）
2．（选择步骤）放进预冷的50毫升锥形离心管
3．（选择步骤）加入xx毫升清理液（Reagent A）清洗1次
4．即刻用刀片切碎组织
5．放进一个预冷的15毫升锥形离心管
6．加入预冷的xx毫升酶解液（Reagent B），充分混匀
7．放进冰槽里孵育3分钟
8．放进4℃台式离心机离心2分钟，速度为1000g
9．小心抽去上清液
10．加入预冷的xx毫升清理液（Reagent A）和xx毫升净化液（Reagent D），充分混匀
11．放进4℃台式离心机离心2分钟，速度为1000g
12．小心抽去上清液
13．加入预冷的xx毫升裂解工作液
14．涡旋震荡5秒，充分混匀
15．即刻放入预冷的DOUNCE匀浆器
16．在冰槽里用研磨棒匀化组织（约80下）（注意：参见注意事项6）
17．将所有组织匀浆物移入15毫升锥形离心管
18．放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为1500g
19．小心移出上清液到另一个新的预冷的15毫升锥形离心管——此步骤去除细胞核和未溶解的细胞
20．加入预冷的xx微升稳定液（Reagent G），混匀
21．放进4℃超速离心机离心20分钟，速度为15000g
22．小心移出上清液到另一个新的预冷的6毫升超速离心管——此步骤去除线粒体和肌纤维沉淀物
23．放进4℃超速离心机再次离心60分钟，速度为120000g
24．小心抽去上清液，保留沉淀颗粒――此步骤获得肌质网组分
25．加入xx毫升保存液（Reagent H），充分混匀沉淀物，使其溶解
26．（选择步骤）放进4℃台式离心机离心15分钟，速度为1500g
27．即刻移入上清液到1.5毫升离心管，放入－70℃冰箱里

二、化学处理法
实验开始前，将试剂盒里的净化液（Reagent D）和活性液（Reagent E）冻融，然后移取xx微升活性液（Reagent E）、 xx毫升净化液（Reagent D）和xx毫升的裂解液（Reagent C）到15毫升锥形离心管里，混匀后，置入冰槽里，标记为裂解工作液。然后进行下列操作。
1．手术取出动物组织，避免或去除脂肪组织，秤重以确定1克组织重量（实验前最好使动物空腹12至24小时）
2．（选择步骤）放进预冷的50毫升锥形离心管
3．（选择步骤）加入xx毫升清理液（Reagent A）清洗1次
4．移入一个液氮冻存管
5．即刻放入液氮罐过夜
6．次日从液氮罐里取出，即刻（最快速度）碾碎组织（注意：切莫使组织冻融）
7．放进一个15毫升锥形离心管
8．加入预冷的xx毫升酶解液（Reagent B），充分混匀
9．放进冰槽里孵育3分钟
10．放进4℃台式离心机离心2分钟，速度为1000g
11．小心抽去上清液
12．加入预冷的xx毫升清理液（Reagent A）和xx毫升净化液（Reagent D），充分混匀
13．放进4℃台式离心机离心2分钟，速度为1000g
14．小心抽去上清液
15．加入预冷的xx毫升裂解工作液
16．涡旋震荡5秒，充分混匀
17．在冰槽里孵育2分钟，期间涡旋震荡5秒一次
18．加入预冷的xx微升强化液（Reagent F）
19．涡旋震荡5秒，充分混匀
20．在冰槽里孵育5分钟，期间涡旋震荡5秒二次（注意：参见注意事项7）
21．加入预冷的xx毫升裂解液（Reagent C），轻轻摇动试管混匀
28．放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为1500g
29．小心移出上清液到另一个新的预冷的15毫升锥形离心管——此步骤去除细胞核和未溶解的细胞
30．加入预冷的xx毫升稳定液（Reagent G），混匀
31．放进4℃超速离心机离心20分钟，速度为15000g
32．小心移出上清液到2个新的预冷的6毫升超速离心管——此步骤去除线粒体和肌纤维沉淀物
33．放进4℃超速离心机再次离心60分钟，速度为120000g
34．小心抽去上清液，保留沉淀颗粒――此步骤获得肌质网组分
35．分别加入xx微升保存液（Reagent H），充分混匀沉淀物，使其溶解
36．（选择步骤）放进4℃台式离心机离心15分钟，速度为1500g
37．即刻合并移入上清液到1.5毫升离心管，放入－70℃冰箱里

注意事项
1．本产品为10次（1克动物组织）操作
2．所有操作均须在4℃或以下状态进行
3．操作时，须无菌操作，避免污染母液，尤其是裂解液（Reagent C）和保存液（Reagent H）
4．建议使用足够的样品量
5．建议严格控制操作时间
6．通常匀化次数为80下达到80％的细胞裂解为理想状态，但不同的组织类型会存在差异。用户可以通过显微镜观察3微升匀浆物的细胞裂解程度：完整细胞呈现发亮的圆环。低于50％可以增加匀化次数
7．通常孵育5分钟达到80％的细胞裂解为理想状态，但不同的组织类型会存在差异。用户可以通过显微镜观察3微升匀浆物的细胞裂解程度：完整细胞呈现发亮的圆环。低于50％可以增加孵育时间和涡旋震荡次数
8．对于难以裂解的组织，采用物理匀浆法是优先推荐的技术处理
9．通常1克动物组织的肌质网含量为500至1000微克蛋白
10．本产品所获得的肌质网纯度和产量最为理想
11．如果需要获得95％以上纯度的肌质网，使用动物组织高质纯化肌质网分离试剂盒－G&VS10066.3
12．本公司提供系列亚细胞分析试剂产品

质量标准
1．本产品经鉴定性能稳定
2．本产品经鉴定分离的肌质网维持正常活性
3．本产品经鉴定不含污染性蛋白酶和核酶

使用承诺
上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒
IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息
单组分订购信息
编号        名称                规格
G&VS10066.2    动物组织活性肌质网分离试剂盒        10次
G&VS10066.2A    清理液（Reagent A）            毫升
G&VS10066.2B    酶解液（Reagent B）            毫升
G&VS10066.2C    裂解液（Reagent C）            毫升
G&VS10066.2D    净化液（Reagent D）        毫升
G&VS10066.2E    活性液（Reagent E）            毫升
G&VS10066.2F    强化液（Reagent F）            毫升
G&VS10066.2G     稳定液（Reagent G）        毫升
G&VS10066.2H     保存液（Reagent H）        毫升

试剂盒订购信息

产品编号        名称            规格
G&VS10005    亚细胞结构分离试剂盒    10次
G&VS10040.1    内质网分离试剂盒        10次
G&VS10040.2    内质网高质纯化试剂盒    10次
G&VS10041.1    通用型内质网形态染色试剂盒    100次
G&VS10041.2    内质网形态高质染色试剂盒    20次
G&VS10066.1    动物组织肌质网粗提分离试剂盒    10次
G&VS10066.2    动物组织活性肌质网分离试剂盒    10次
G&VS10066.3    动物组织高质纯化肌质网分离试剂盒    10次
G&VS10066.4    动物组织肌质网横小管（T Tube）分离试剂盒    10次
G&VS10066.5    动物组织肌质网三联体（TRIAD）分离试剂盒    10次
G&VS10100    动物细胞核分离试剂盒    50次
G&VS10117    细胞微管分离试剂盒        10次
G&VS10118    细胞溶酶体分离试剂盒    10次
G&VS10119    细胞过氧化酶体分离试剂盒    10次
G&VS10121    细胞溶酶体形态染色试剂盒    20次
G&VS10143.1    动物细胞染色体分离试剂盒    20次
G&VS10143.2    植物细胞染色体分离试剂盒    20次
G&VS10143.3    酵母细胞染色体分离试剂盒    20次