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4×LAMP MasterMix（探针法）

发布时间：2025/9/4 9:53:55 阅读次数：59

CAT#:JW-220303
低温运输，-20℃保存

4×LAMP MasterMix（探针法）

产品及特点
4×LAMP MasterMix（探针法）含有荧光探针LAMP扩增所需的所有成分，可以对靶片段进行实时定量LAMP分析。LAMP即Loop-Mediated Isothermal Amplification（环介导等温扩增），它利用4条模板专一的特异引物和具有链置换能力的Bst DNA 聚合酶，在等温条件下(65℃左右) 30－60分钟完成扩增。该技术在灵敏度、特异性和检测范围等指标上能媲美甚至优于定性PCR技术，同时还不需要昂贵的仪器设备。目前已成功应用于核酸的快速检测，广泛用于各个领域。本试剂盒具有下列特点：
1.即开即用，含有本公司开发的LAMP专用荧光探针，专一性强。
2.在荧光定量PCR仪器上进行扩增时，可以实时跟踪扩增过程，但不宜用于定量（这是LAMP技术决定的）。
3.高特异性，精心优化的配方，非特异扩增比自配的试剂更低。
4.高灵敏度，一般比PCR灵敏高一个数量级（取决于引物的筛选）。
5.4×MasterMix，最多可加入14 μL模板，降低漏检率。
6.本试剂盒足够50次20 μL体系的LAMP扩增。
7.提供扩增对照，便于在遇到困难时分析原因。
8.本产品只能用于科研，不能用于临床。

规格及成分
本产品使用5孔盒包装
成份                                                                       编号        规格            包装
4×LAMP MasterMix（含荧光探针，待加酶）     220303a    200 μL    0.5mL绿盖管
Bst DNA聚合酶2.0                                            11-220319    50 μL    0.5mL红盖管
LAMP阳性对照模板-引物混合物                        220402        50 μL 0.5mL黄盖管
使用手册                                                            220303sc    1份           1份

运输及保存
低温运输，-20℃保存，有效期一年。

自备试剂
LAMP模板、LAMP引物

使用方法
1.制备模板DNA：用于选用合适的方法制备模板DNA。如果有N个样品，最好设置N+2个样品制备，多出的两个一个是样品制备阳性对照，一个是样品制备阴性对照。
2.配制自备的20×LAMP引物混合液。
先加超纯水将合成的HPLC级别的下列引物干粉稀释到下表所标注的母液浓度，然后在一新的离心管中按表中所列体积加入各种引物母液和超纯水，最后得到0.1 mL的20×LAMP引物混合液，此混合液足够100次20 μL体系的LAMP扩增。如果需要配制的20×LAMP引物混合液体积异于0.1 mL，则各成分的用量请按比例调整。引物混合液可以在-20℃放置2年。
引物名称    母液浓度    加母液量    在20×LAMP引物混合液中的浓度
FIP引物        100 μM      32 μL      32 μM
BIP引物        100 μM      32 μL        32 μM
F3引物          100 μM      4 μL     4 μM
B3引物         100 μM    4 μL     4 μM
Loop F          100 μM   8 μL      8 μM
Loop B          100 μM   8 μL        8 μM
超纯水                      12 μL
终体积                         0.1 mL
注：如果没有Loop引物，则用水替代。
3.在冰上融化4×LAMP MasterMix（含荧光探针，待加酶），混匀，稍离心。第一次使用时，请将50 μL Bst DNA聚合酶2.0全部加入到4×LAMP MasterMix中轻柔混匀，然后再使用。如果有N个样品，则在N+2个反应管中加入以下组份，多出的一管是LAMP扩增阳性对照（PC），一管是LAMP扩增阴性对照（NC）：
成份                                N+2个样品管    LAMP扩增PC    LAMP扩增NC
4×LAMP MasterMix
（含荧光探针，加酶后）    5 μL            5 μL              5 μL
自备20×LAMP引物混合液    1 μL                 不加              1 μL
LAMP阳性对照
模板-引物混合物                不加                     5 μL              不加
自备模板DNA              1-14 μL                  不加              不加
补自备超纯水到                20 μL                    20 μL          20 μL
4.混匀，置于荧光定量PCR仪器中65℃保温60分钟，每分钟采集一次SYBR通道的荧光信号。如果荧光定量PCR仪不能设置恒温扩增参数，可以把变性复性和扩增三个温度都设置为65℃，三个步骤的总时间为1分钟即可，共60个循环，在任何一步采集荧光信号即可。
5.结果分析：实验有效性判定。如果两个阳性对照能够得到标准的S型扩增曲线而两个阴性对照都没有扩增，则实验有效，才有必要对样品进行分析。如果阳性对照没有出现S型扩增曲线，则说明试剂盒可能失效，实验无效。如果阴性对照有S型扩增曲线，则说明LAMP引物设计得不好，有非特异扩增，需要重新优化引物。也可能是环境或试剂有污染，实验无效。遇到实验无效的情况，请跟厂家客户联系，分析原因后再恢复实验。
6.如果实验有效，则分析样品。凡是有S扩增曲线的，可以判断为阳性。凡是没有S扩增曲线的，可以判断为阴性。典型的荧光检测结果见下图。左边为阳性结果，扩增曲线为S型，右边为阴性结果，扩增曲线不呈S型。

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