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通用型DNA损伤彗星中性银染检测完全试剂盒产品说明书

发布时间：2025/9/5 17:04:52 阅读次数：19

通用型DNA损伤彗星中性银染检测完全试剂盒产品说明书

主要用途
通用型DNA损伤彗星中性银染检测完全试剂是一种旨在采用组织细胞中性凝胶电泳，在电场环境下，损伤变性的DNA片段迁移形成特定的形态，即DNA移动尾巴，来进行体外评价和半定量分析DNA损伤程度的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于新鲜动物细胞、组织、血液、骨髓等样品的DNA损伤研究，包括DNA链断裂、氧化性碱基损伤、DNA剪切损伤、DNA交联、DNA修复等，应用于环境和药物毒理学、放射学、氧化应急反应等研究。产品严格无菌，即到即用，性能稳定，操作简便，重复一致。

技术背景
彗星检测技术（Comet assay），又称为单细胞凝胶电泳检测技术（single cell gel electrophoresis assay；SCGE）或微凝胶电泳检测技术（microgel electrophoresis assay），是基于变性切离的DNA片段，在电场的影响下，从细胞中移出的原理，而完整的超螺旋DNA仍然保持在细胞核内。通过凝胶电泳，呈现出分子迁移图形，形成彗星拖尾（comet tail）现象，即完整DNA的细胞染色体为“头”，而松散和断裂的DNA为“尾”，以此评价DNA损伤程度。这是分析单一细胞DNA链断裂的敏感方法之一。其技术方法的基本步骤是：第一，细胞固定包埋在凝胶里；第二，细胞裂解处理；第三，DNA变性处理；第四，电泳迁移；第五，染色和图像分析。由此观察DNA迁移形态，进行体外检测，成为细胞DNA损伤研究的基本手段。其中电泳条件将决定检测的敏感程度。中性电泳（neutral electrophoresis）可以检测单链DNA断裂、双链DNA断裂、少量无嘌呤核酸位点（apurinic site）和无嘧啶核酸位点（apyrimidic site）等DNA损伤。中性电泳主要用于检测双链DNA断裂。

产品内容
胶体液（Reagent A）        毫升
基质液（Reagent B）        毫升
清理液（Reagent C）        毫升
裂解液（Reagent D）    毫升
碱性液（Reagent E）        毫升
电泳液（Reagent F）        毫升
净化液（Reagent G）    毫升
固定液A（Reagent H）    毫升
固定液B（Reagent I）    毫升
染色液（Reagent J）        毫升
中和液（Reagent K）        毫升
显影液A（Reagent L）    微升
显影液B（Reagent M）    微升
终止液（Reagent N）    毫升
产品说明书        1份

保存方式
保存在4℃冰箱里；染色液（Reagent J）避免光照；有效保证6月

用户自备
无离子水：用于配制工作液
磨砂载玻片和盖玻片：用于放置样品进行微凝胶电泳的器材
电泳槽：用于微凝胶电泳的装置
恒温培养箱或恒温水槽：用于孵育反应
1.5毫升离心管：用于样品操作的容器
90 mm培养皿：用于样品处理、染色等的容器
光学显微镜：用于观察细胞彗星现象

实验步骤
一、琼脂载玻片准备
1．准备1张完全磨砂载玻片，磨砂面朝上
2．将胶体液（Reagent A）置于微波炉里加热溶化（注意：避免溢出）
3．放进45℃恒温水槽孵育10分钟
4．移出xx微升胶体液（Reagent A）到载玻片中间
5．盖上洁净的盖玻片
6．轻压盖玻片5分钟，确保胶体液铺展
7．放进4℃冰箱里备用

二、样品准备
实验开始前，将基质液（Reagent B）置于微波炉里加热溶化，然后放进45℃恒温水槽备用。然后进行下列操作。
1．准备好新鲜培养细胞、组织样本、血液样品等（1 X 105细胞）
2．移入到1.5毫升离心管
3．放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为300g
4．加入xx毫升清理液（Reagent C），混匀
5．移取20微升到新的1.5毫升离心管
6．加入xx微升在45℃恒温水槽里的基质液（Reagent B）
7．用枪头上下抽吸混匀
8．用大拇指推动移走上述制备的载玻片上的盖玻片
9．即刻移取75微升细胞基质混合液到载玻片上
10．用新的盖玻片盖上
11．轻压盖玻片5分钟，确保细胞基质混合液铺展
12．放进4℃冰箱里冷却10分钟，直至胶体凝结，避免光照
13．用大拇指推动移走盖玻片
14．将载玻片放进9cm培养皿
15．加入xx毫升预冷的裂解液（Reagent D）
16．放进4℃冰箱里孵育60分钟
17．倒去裂解液

三、凝胶电泳
1．加入xx毫升碱性液（Reagent E）到上述9cm培养皿
2．室温下孵育30分钟
3．倒去碱性液（Reagent E）
4．移出xx毫升电泳液（Reagent F）到250毫升三角烧瓶里
5．加入225毫升无离子水，充分混匀后，标记为电泳工作液
6．加入xx毫升电泳工作液到上述9cm培养皿
7．室温下孵育5分钟
8．倒去电泳工作液
9．重复实验步骤6至8一次
10．将载玻片置于水平电泳槽里
11．加入适量的电泳工作液到电泳槽里，恰好在载玻片之上
12．插上电源，设定电压1伏/厘米（根据电泳槽正负电极的距离）
13．在4℃环境下，电泳10分钟
14．断开电源，取出载玻片
15．放进9cm培养皿
16．加入xx毫升净化液（Reagent G）
17．在4℃冰箱里孵育5分钟
18．倒去净化液
19．空气中晾干

四、染色分析
1．小心加入xx毫升固定液A（Reagent H）到上述9cm培养皿里
2．小心加入xx毫升固定液B（Reagent I），混匀
3．置于平式震荡仪上，在室温下孵育30分钟，速度为50RPM
4．小心倒去固定液
5．小心加入8毫升用户自备的无离子水
6．小心加入xx毫升染色液（Reagent J）
7．置于平式震荡仪上，在室温下孵育30分钟，速度为50RPM，避免光照
8．小心倒去染色液（Reagent J）
9．小心加入10毫升用户自备的无离子水
10．置于平式震荡仪上，在室温下孵育1分钟，速度为50RPM
11．小心倒去无离子水
12．准备1个15毫升锥形离心管
13．加入8毫升用户自备的无离子水
14．加入xx毫升中和液（Reagent K）
15．加入xx微升显影液A（Reagent L）
16．加入xx微升显影液B（Reagent M），混匀
17．小心倒入9cm培养皿里
18．置于平式震荡仪上，在室温下孵育6分钟，速度为50RPM（注意：可见金黄色条带；避免过度染色）
19．小心倒去显影液
20．小心加入8毫升用户自备的无离子水
21．小心加入xx毫升终止液（Reagent N），混匀
22．置于平式震荡仪上，在室温下孵育30分钟，速度为50RPM（注意：可以保存在终止液里）
23．盖上新的盖玻片
24．即刻在光学显微镜下观察并拍照记录：
25．分析参数：
7. 构建DNA损伤程度和药物处理剂量（dose）或时间（time）曲线

注意事项
1．本产品为20次操作
2．操作时，须戴手套
3．整个操作，建议在暗光下进行
4．建议使用新鲜培养的动物细胞、组织、血液等；细胞量为105细胞/毫升
5．可以使用100微摩尔过氧化氢或25微摩尔高锰酸钾冰上孵育10分钟预处理样品作为阳性对照
6．操作时小心轻柔，避免胶体脱位
7．电泳温度过高，会造成胶体脱位
8．电泳时，根据用户所使用的电泳槽的电极两端实际距离，确定电压
9．细胞DNA损伤彗星图像如下（400倍）
10．本公司提供系列DNA损伤检测分析试剂产品

质量标准
1．本产品经鉴定性能稳定
2．本产品经鉴定重复性好

使用承诺
上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒
IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息
单组分订购信息
编号        名称                    规格
G&VS10074.5    通用型DNA损伤彗星中性银染检测完全试剂盒    20次
G&VS10074.5A     胶体液（Reagent A）                毫升
G&VS10074.5B     基质液（Reagent B）                毫升
G&VS10074.5C     清理液（Reagent C）                毫升
G&VS10074.5D     裂解液（Reagent D）            毫升
G&VS10074.5E     碱性液（Reagent E）                毫升
G&VS10074.5F     电泳液（Reagent F）                毫升
G&VS10074.5G     净化液（Reagent G）            毫升
G&VS10074.5H    固定液A（Reagent H）            毫升
G&VS10074.5I    固定液B（Reagent I）            毫升
G&VS10074.5J    染色液（Reagent J）                毫升
G&VS10074.5K    中和液（Reagent K）                毫升
G&VS10074.5L    显影液A（Reagent L）            毫升
G&VS10074.5M    显影液B（Reagent M）            毫升
G&VS10074.5N    终止液（Reagent N）            毫升

试剂盒订购信息
产品编号        名称                    规格
G&VS10074.1    通用型DNA损伤彗星检测试剂盒            20次
G&VS10074.2    通用型DNA损伤彗星检测完全试剂盒（荧光染色）    20次
G&VS10074.3    通用型DNA损伤彗星检测完全试剂盒（银染）    20次
G&VS10074.4    通用型DNA损伤彗星中性检测完全试剂盒（荧光染色）    20次
G&VS10074.5    DNA损伤彗星中性检测完全试剂盒（银染）        20次
G&VS10075    过氧化氢处理DNA损伤彗星荧光检测试剂盒        20次
G&VS10076    内切核酸酶III处理DNA损伤彗星荧光检测试剂盒    20次
G&VS10077    FGP处理DNA损伤彗星荧光检测试剂盒        20次
G&VS10078    紫外线处理DNA损伤彗星荧光检测试剂盒        20次
G&VS10079.1    细胞DNA损伤彗星荧光检测试剂盒        20次
G&VS10079.2    细胞DNA损伤彗星完全荧光检测试剂盒        20次
G&VS10080.1    组织DNA损伤彗星荧光检测试剂盒        20次
G&VS10080.2    组织DNA损伤彗星完全荧光检测试剂盒        20次
G&VS10081.1    植物组织DNA损伤彗星荧光检测试剂盒        20次
G&VS10081.2    植物组织DNA损伤彗星完全荧光检测试剂盒        20次
G&VS10081.3    植物培养细胞DNA损伤彗星荧光检测试剂盒        20次
G&VS10081.4    植物培养细胞DNA损伤彗星完全荧光检测试剂盒    20次
G&VS10082.1    细菌DNA损伤彗星荧光检测试剂盒        20次
G&VS10082.2    细菌DNA损伤彗星完全荧光检测试剂盒        20次
G&VS10128    果蝇DNA损伤彗星荧光检测试剂盒        20次
G&VS10129    精子细胞DNA损伤彗星荧光检测试剂盒        20次
G&VS10130    荧光原位杂交彗星检测试剂盒            20次