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CI混合液（24:1，核酸纯化用）

发布时间：2025/9/8 11:19:18 阅读次数：21

CAT#:JW-220163
常温运输和保存

CI混合液（24:1，核酸纯化用）

产品及特点
本产品是氯仿-异戊醇（Chloroform-Isoamyl Alcohol, CI）的24:1的混合液，用于核酸提取时去除蛋白质、多糖、脂类和酚类等杂质。
再基于苯酚的核酸纯化中，苯酚的作用是使裂解液中的蛋白质变性，同时抑制核酸酶对核酸的降解。用苯酚处理裂解液时，由于蛋白分子表面的很多极性基团与苯酚相似相溶，故蛋白分子溶于酚相，而核酸溶于水相，从而将核酸和蛋白质分开。但苯酚和水有10%左右的互溶，因此酚抽提后，必须用CI混合液处理以让水和酚彻底分开，彻底去除水相中10%左右的残留苯酚，否则它们会严重抑制后续的酶反应。CI混合液中异戊醇的作用是降低表面张力，从而减少操作过程（常常有震荡步骤）中气泡的产生，而这些气泡的表面张力可能会使核酸断裂。另外，异戊醇还有助于水相和酚相分相，使离心后的上层水相（含核酸）、中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定，便于移取上清。

规格及成分
本产品采用大立盒包装
成分                                                编号   规格   包装
CI混合液（24:1，核酸纯化用）    220163    250 mL    250 mL
棕色玻璃瓶
使用手册                                      220163sc    1份无

运输及保存
常温运输和保存，有效期为12个月。

自备物品
如果用于沉淀法回收核酸，则需要无水乙醇或异丙醇、3M乙酸钠溶液 pH5.2、75%乙醇和超纯水。如果用于过柱法回收核酸，则需要硅胶模离心吸附柱，上柱液，洗柱液和超纯水。

使用方法
该试剂为基于苯酚的核酸提取过程中的必须试剂，使用方法参考分子克隆手册等参考书，或实验室SOP。下列操作仅以0.5mL样本供参考。
一、沉淀法：
1.将0.5mL含核酸的细胞裂解液，或含有核酸、DNA、蛋白质、脂类的混合液转移到1.5mL塑料离心管中。
2.加入0.5mL的自备Tris-饱和酚（对DNA纯化）或酸酚（对RNA纯化）和0.2mL的本产品。
3.涡旋震荡2分钟。
4.常温13000g离心5分钟，溶液将呈两层相。将含有核酸的水相转移到一个新的离心管中。两相的相对位置跟样本比重有关，并不是任何时候无色水相都在上层。如果样本含盐浓度高，比重大，水相也可能在下层。
5.在上清中加入0.1倍体积的3M乙酸钠溶液，pH5.2和两倍体积的自备无水乙醇（两倍体积的乙醇可以用一倍体积的异丙醇替代），颠倒10次充分混匀。
6.常温13000g离心15分钟。
7.小心弃上清，不要触及管底离心面的沉淀。
8.加入1mL 75%乙醇，颠倒10次。
9.常温13000g离心3分钟。
10.小心弃上清后短暂离心30秒，去掉残留的液体（约50uL）。
11.室温敞开盖子两分钟。
12.加入超纯水溶解核酸，然后进行浓度测定、电泳，PCR等后续检测。

二、过柱法：
13.将0.5mL含核酸的细胞裂解液，或含有核酸、DNA、蛋白质、脂类的混合液转移到1.5mL塑料离心管中。
14.加入0.5mL的自备Tris-饱和酚（对DNA纯化）或酸酚（对RNA纯化）和0.2mL的本产品。
15.涡旋震荡2分钟。
16.常温13000g离心5分钟，溶液将呈两层相。将含有核酸的无色水相转移到一个新的离心管中。两相的相对位置跟样本比重有关，并不是任何时候无色水相都在上层。如果样本含盐浓度高，比重大，也可能在下层。
17.在上清中加入2倍体积的自备上柱液，所用体积跟所用上柱液的配方相关。
18.颠倒混匀，取0.7mL样本和上柱液的混合液上柱。
19.常温13000g离心半分钟，弃穿透液。
20.再取0.7mL样本和上柱液的混合液上同一个柱子。
21.常温13000g离心半分钟，弃穿透液。
22.重复第20-第21步，直到混合液全部上柱。
23.加入0.7mL洗柱液。
24.常温13000g离心半分钟，弃穿透液。
25.重复第23和第24步一次。
26.不加任何溶液，将吸附柱离心半分钟。
27.在吸附柱中加入30-50uL的超纯水，室温放置2分钟后，将吸附柱放入一个新的1.5mL离心管中，13000g离心半分钟，收集的穿透液就是纯化的核酸溶液。
28.对所得的核酸溶液进行浓度测定、电泳，PCR等后续检测。

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