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实时WGA全基因组扩增试剂盒（MDA荧光染料法）

发布时间：2025/9/8 11:21:23 阅读次数：13

CAT#:JW-220166-25
低温运输、-20℃保存

实时WGA全基因组扩增试剂盒（MDA荧光染料法）

产品及特点
本产品是用于MDA（Multiplex Displacement Amplification）技术的全基因组DNA扩增试剂盒，它利用随机引物结合在全基因组（变性后）的不同位置，然后利用具有超长DNA合成能力的phi29 DNA聚合酶，进行链取代合成。MDA扩增DNA的示意图如下：

本产品有如下特点：
1.基于phi29 DNA聚合酶的高保真性、高合成率和超强链取代能力，故所得扩增DNA突变率比PCR低至少10倍。
2.可以将基因组DNA扩增上万倍，非常适用于痕量珍贵样品。
3.可使用各种来源的样品，尤其是痕量法医样品，包括全血，干血，发根，口腔粘膜刮液培养细胞，真菌和病毒等。
4.操作简便快捷，恒温（30℃）反应，无须贵重PCR仪即可实现扩增。
5.含有荧光染料，故可以实时检测扩增效果，不需要反应结束后电泳检测，避免浪费宝贵的扩增产物。
6.产物可用于多种后续试验，包括多重PCR、长片断PCR、定量PCR、克隆、文库构建、单倍型分析、测序、基因芯片分析、各种遗传分析（片段差异，微卫星差异，SNP，STR）等。
7.本产品足够25次10 mL体系的全基因组扩增。
8.本产品只能用于科研，且只适用于扩增纯化好的基因组DNA。

规格及成分
本产品采用塑料袋包装
成份                                                编号          规格      包装
2×MDA法全基因组扩增缓冲液    220166a    125 mL    0.5 mL绿盖管
phi 29 DNA聚合酶，10U/mL      220166b     25 mL      0.5 mL红盖管
使用手册                                  220166sc       1份   无

运输及保存
低温运输、-20℃保存，有效期一年。

自备试剂
超纯水（无DNA和DNase污染）

使用方法
1.如果有N个DNA模板，则标记2N个PCR管，多出的一组为不加模板的阴性对照管。下表以1个样本为例子：
成份                                               样品管    无模板对照
2×MDA法全基因组扩增缓冲液      5 mL      5 mL
自备DNA样本（10 ng-100 ng）    1-4 mL    不加
自备超纯水                                补到9 mL    补到9 mL
2.在PCR仪器上95℃3分钟变性模板DNA。注意：必须打开热盖。
3.冰上放置待用。
4.各加入1 mL phi 29 DNA聚合酶（10U/mL），轻柔吹打混合均匀。
5.放回PCR仪器，设置MDA反应为30℃ 24小时，65℃ 10分钟。由于phi29 DNA聚合酶有DNA外切活性，所以强烈推荐30℃扩增反应结束后，必须65℃保温20分钟以将酶彻底灭活，否则在保存过程中它会逐渐降解扩增得到的DNA。本产品含有荧光染料，故最好使用荧光定量PCR仪，设置在30℃时，每10分钟在SYBR通道采集一次荧光信号。10小时后，阳性样品应该有标准的S扩增曲线，无模板对照应该没有扩增曲线。示例如下：

6.如果使用的常规PCR扩增，需要电泳检测（由于样本宝贵，不推荐此法）。
7.-20℃长期放置或立即使用。

关联产品
phi29 DNA聚合酶，10U/mL